C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2274315
The present invention has provided a method for detection of the presence or absence of chromosomal abnormalities which are associated with a condition e.g. leukaemia in a subject and are each defined by at least one characteristic nucleic acid sequence. In general, the method comprises subjecting a sample of nucleic acids to a multiplex molecular amplification procedure. The multiplex molecular amplification procedure comprises the use of at least 7 mutually distinct primers in one single reaction mixture, each of the at least 7 mutually distinct primers defining an end of at least one characteristic nucleic acid sequence, and wherein at least one of the at least 7 mutually distinct primers defines the first ends of at least two characteristic nucleic acid sequences, said at least two characteristic nucleic acid sequences each being defined in their opposite ends by mutually distinct primers selected from the remainder of the at least 7 mutually distinct primers, whereby the number of amplified characteristic nucleic acid sequences which can be detected upon conclusion of the amplification reaction is at least 1/2xn+1, wherein n is the number of the at least 7 mutually distinct primers. In one embodiment, the use of an internal positive standard containing: I) a nucleic acid fragment present in the sample, and II) primers for amplification of a nucleotide sequence of said nucleic acid fragment is incorporated into the procedure.
L'invention concerne une méthode de détection de l'absence ou de la présence d'anomalies chromosomiques associées à un état chez un individu, chacune d'elles étant définie par au moins une séquence nucléotidique caractéristique. En général, ladite méthode consiste à soumettre un échantillon d'acides nucléiques à une procédure d'amplification moléculaire multiplex, laquelle consiste à utiliser au moins 7 amorces différentes dans un seul mélange réactionnel. Chacune des amorces différentes au nombre minimum de 7 définit une extrémité d'au moins une séquence nucléotidique caractéristique, et au moins une des amorces définit les premières extrémités d'au moins deux séquences nucléotidiques caractéristiques, lesquelles sont définies dans leurs extrémités opposées par des amorces distinctes choisies parmi les amorces restantes. Le nombre de séquences nucléotidiques caractéristiques amplifiées pouvant être détectées à la fin de la réaction d'amplification est d'au moins 1/2xn+1, n étant le nombre correspondant aux amorces distinctes, soit au moins 7. Dans un mode de réalisation, l'utilisation d'un étalon positif contenant I) un fragment d'acide nucléique présent dans l'échantillon, et (II) des amorces pour l'amplification d'une séquence nucléotidique dudit fragment d'acide nucléique fait partie de la procédure.
Hokland Peter
Pallisgaard Niels
Gowling Lafleur Henderson Llp
Pallisgaard Niels
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1957136