Purification of antigen-specific t cells

Details Purification of antigen-specific t cells Purification of antigen-specific t cells

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 5/0783 (2010.01) A61K 35/14 (2006.01) C07K 1/22 (2006.01) C07K 17/00 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/554 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01)

Patent

CA 2264925

A new method to capture, purify and expand antigen-specific T lymphocites has been developed using magnetic beads coated with recombinant MHC class I molecules. This method was optimized using homogenous populations of naive T cells purified from mice transgenic for the 2C T cell receptor (TCR). These T cells were captured on beads coated with MHC class I molecules and the relevant antigenic peptides. MHC and peptide specificity was confirmed by the usage of irrelevant MHC peptide combinations. An enrichment of 800 to 1600 fold was measured, using 2C T cells mixed with irrelevant T cells, starting from a 2C T cell frequency of 1/3000. The same approach was used to purify antigen-specific CD8+ T cells from total CD8+ T cells from naive mice. The recovered cells could be expanded and specifically kill target cells in vitro; they had a significant effect in vivo as well. We expect this procedure to be suitable to purify and expand in vitro tumor- and virus-specific killer T cells for use in cell therapy.

Un nouveau procédé pour capturer, purifier et développer des cellules T spécifiques de l'antigène a été mis au point par l'utilisation de billes magnétiques enduites de molécules CMH recombinées de classe I. Pour optimiser le procédé, on a utilisé des populations homogènes de cellules T naïves purifiées obtenues chez la souris transgénique pour le récepteur des cellules T 2C (TCR). Ces cellules T ont été capturées sur des billes enduites de molécules CMH de classe I et des peptides antigéniques pertinents. La spécificité des molécules CMH et des péptides a été confirmée par l'emploi de combinaisons inopérantes de molécules CMH et de peptides. On a mesuré une amélioration 800 à 1600 fois supérieure en utilisant des cellules T 2C mélangées avec des cellules T inopérantes, à partir d'une fréquence de cellules T 2C de 1/3000. La même approche a été adoptée pour purifier des cellules T CD8?+¿ spécifiques de l'antigène à partir de cellules T CD8?+¿ totales issues de la souris naïve. Les cellules récupérées pouvaient être développées pour tuer spécifiquement des cellules cibles in vitro; elles ont également eu un effet non négligeable in vivo. Ce procédé est utile pour purifier et développer in vitro des cellules T tueuses de tumeurs spécifiques et de virus spécifiques, lesdites cellules pouvant être utilisées en cytothérapie.

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