C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2234736
A new contiguous genome sequencing method is described which allows the contiguous sequencing of a very long DNA without need to be subcloned. It uses the basic PCR technique but circumvents the usual need of this technique for the knowledge of two primers for contiguous sequencing, enabling the knowledge of only one primer sufficient. The present invention makes it possible to PCR amplify a DNA adjacent to a known sequence with which one primer can be made without the knowledge of the second primer binding site present in the unknown sequence. The present invention could thus be used to contiguously sequence a very long DNA such as that contained in a YAC clone or a cosmid clone, without the need for subcloning smaller fragments, using the standard PCR technique. It can also be used to sequence a whole chromosome or genome without any need to subclone it. The technique can also be used to amplify an unknown DNA in which no sequence is known and to sequence that DNA.
L'invention concerne un nouveau procédé de séquençage génomique contigu qui permet le séquençage contigu d'un ADN très long sans qu'il soit nécessaire de sous-cloner celui-ci. Ce procédé fait appel à la technique de base de PCR mais, selon ce procédé, il n'est plus nécessaire, comme c'est le cas avec la technique de PCR classique, de connaître deux amorces pour effectuer le séquençage contigu, la connaissance d'une seule amorce étant suffisante. Grâce à la présente invention il est possible d'amplifier par PCR un ADN à côté d'une séquence connue avec laquelle une amorce peut être réalisée sans que le site de liaison de la seconde amorce présent dans la séquence inconnue soit connu. Le procédé selon l'invention peut donc être mis en oeuvre pour effectuer le séquençage contigu d'un ADN très long tel que celui contenu dans un clone de chromosome artificiel de levure ou YAC ou un clone de cosmide, sans qu'il soit nécessaire de sous-cloner des fragments plus petits, selon la technique de PCR standard. Ce procédé peut également être mis en oeuvre pour le séquençage d'un chromosome ou d'un génome entier sans qu'il soit nécessaire de le sous-cloner. Cette technique peut également être appliquée pour l'amplification d'un ADN inconnu dans lequel aucune séquence n'est connue, et pour le séquençage de cet ADN.
Goudreau Gage Dubuc
Senapathy Periannan
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1959766