C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/74 (2006.01) A61K 39/02 (2006.01) A61K 39/112 (2006.01) C07K 14/195 (2006.01)
Patent
CA 2286210
An attenuated strain of Salmonella typhimurium has been used as a vehicle for oral genetic immunization. Eukaryotic expression vectors containing the genes for .beta.-galactosidase, or truncated forms of ActA and listeriolysin - two virulence factors of Listeria monocytogenes - that were controlled by an eukaryotic promoter have been used to transform a S. typhimurium aroA strain. Multiple or even single immunizations with these transformants induced a strong cytotoxic and helper T cell response as well as an excellent antibody response. Multiple immunizations with listeriolysin transformants protected the mice completely against a lethal challenge of L. monocytogenes. Partial protection was already observed with a single dose. ActA appeared not to be a protective antigen. The strength and the kinetics of the response suggested that the heterologous antigens were expressed within the eukaryotic host cells following transfer of plasmid DNA from the bacterial carrier strain. Transfer of plasmid DNA could be unequivocally shown in vitro using primary peritoneal macrophages. The demonstration of RNA splice products and expression of .beta.- galactosidase in the presence of tetracycline - an inhibitor of bacterial protein synthesis - indicated that the gene was expressed by host cells rather than bacteria. Oral genetic immunization with Salmonella carriers provides a highly versatile system for antigen delivery, represents a potent system to identify candidate protective antigens for vaccination, and will permit efficacious generation of antibodies against virtually any DNA segment encoding an open reading frame.
On a utilisé une souche atténuée de Salmonella typhimurium en tant que véhicule d'immunisation génétique orale. On a utilisé des vecteurs d'expression eucaryotes contenant les gènes pour .beta.-galactosidase ou des formes tronquées de ActA et listériolysine - deux facteurs de virulence de Listeria monocytogenes - contrôlés par un promoteur eucaryote, dans le but de transformer une souche de S. typhimurium aroA. Des immunisations multiples ou même uniques avec ces transformants ont provoqués une réaction puissante cytotoxique et une réaction de lymphocytes T4, ainsi qu'une excellente réaction d'anticorps. Des immunisations multiples avec des transformants de listériolysine ont totalement protégés les souris contre une attaque mortelle de L. monocytogenes. On avait déjà observé une protection partielle avec une seule dose. ActA s'est avéré ne pas être un antigène protecteur. La puissance et la cinétique de la réaction ont suggéré que les antigènes hétérologues ont été exprimés à l'intérieur des cellules hôtes eucaryotes suivant le transfert d'ADN du plasmide depuis la souche bactérienne porteuse. On a pu montrer sans équivoque le transfert de l'ADN du plasmide in vitro au moyen de macrophages primaires péritonéaux. La démonstration des produits d'épissure d'ARN et l'expression de .beta.-galactosidase en présence de tétracycline - un inhibiteur de la synthèse de protéines bactériennes - a indiqué que le gène avait été exprimé par des cellules hôtes plutôt que par des bactéries. L'immunisation génétique orale avec des souches porteuses de Salmonella constitue un système extrêmement souple d'administration d'antigènes, représente un moyen puissant d'identification d'antigènes protecteurs candidats pour la vaccination et permettra de générer efficacement des anticorps contre virtuellement tout segment d'ADN codant un cadre de lecture ouvert.
Chakraborty Trinad
Darji Ayub
Gerstel Birgit
Guzman Carlos
Timmis Kenneth
Gesellschaft Fur Biotechnologische Forschung Mbh (gbf)
Macrae & Co.
LandOfFree
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