C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2204378
Disclosed is a method for determining a nucleotide sequence of DNA product amplified by polymerase chain reaction not requiring removal of primers and/or 2'-deoxyribonucleoside-5'-triphosphates and/or derivatives thereof, which comprises reacting ribonucleoside-5'-triphosphates comprising ATP, GTP, CTP, UTP and derivatives thereof and one or more of 3'-deoxyribonucleotide-5'-triphosphates comprising 3'-dATP, 3'-dGTP, 3'- dCTP, 3'-dUTP and derivatives thereof in the presence of an RNA polymerase and a DNA product which has been amplified by polymerase chain reaction and contains a promoter sequence for the RNA polymerase to afford a nucleic acid transcription product, separating the obtained nucleic acid transcription product and determining a nucleic acid sequence from the resluting separated fractions.
L'invention concerne un procédé de séquençage de l'ADN pour déterminer la séquence nucléotidique d'un produit d'ADN amplifié par la réaction en chaîne de la polymérase sans enlever une amorce et/ou un 2'-désoxyribonucléoside 5'-triphosphate et/ou son dérivé. Ce procédé consiste à préparer un produit de transcription des acides nucléiques par la réaction de ribonucléoside 5'-triphosphates constitués d'ATP, GTP, CTP, UTP ou leurs dérivés avec un ou plusieurs 3'-désoxyribonucléotide 5'-triphosphates constitués de 3'-dATP, 3'-dGTP, 3'-dCTP, 3'-dUTP et leurs dérivés en présence d'une ARN-polymérase et du produit d'ADN amplifié précité contenant la séquence promotrice de l'ARN-polymérase, à séparer le produit de transcription ainsi préparé, et à lire la séquence des acides nucléiques dans la fraction séparée.
Hayashizaki Yoshihide
Sasaki Nobuya
Dennison Associates
The Institute Of Physical And Chemical Research
LandOfFree
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