Method for the detection of a pathogenic form of a prion...

G - Physics – 01 – N

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G01N 33/68 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01)

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CA 2520487

Method for the detection of a pathogenic form of a prion protein in a sample, comprising providing a container, pretreating the container to deposit on a surface of the container a coating of a cellulose derivative capable of favoring the binding of pathogenic prion protein to said container surface over the binding of cellular prion protein, incubating the sample in said container to bind any pathogenic prion protein present in the sample to said container surface, labelling the thus immobilized pathogenic prion protein, if present, with an appropriate labelling agent using an anti-prion antibody capable of binding to pathogenic prion protein and detecting the presence of labelling agent attached to the container surface. Coating a surface of a microtitre plate well with nitrocellulose allows to perform an ELISA for quantification of pathogenic prions in a suspected sample, especially after enzymatic digestion of the sample with an enzyme like proteinase K, by enhancing binding of pathogenic prions and/or reducing binding of cellular (non-pathogenic) prions.

La présente invention concerne une technique de détection d'une forme pathogène de protéine prionique dans un échantillon qui consiste à prendre un récipient et, prétraiter ce récipient de façon à déposer sur une surface de celui-ci un revêtement d'un dérivé de cellulose capable de favoriser la liaison d'une protéine prionique pathogène avec cette surface de récipient sur la liaison de protéine prionique cellulaire, à incuber l'échantillon dans ce récipient de façon à lier toute protéine prionique pathogène présente dans cet échantillon à la surface de ce récipient, à marquer cette protéine prionique immobilisée, le cas échéant, avec un agent de marquage approprié utilisant un anticorps de prion capable de se lier à la protéine prionique pathogène et é détecter la présence d'agent de marquage fixé à la surface du récipient. Revêtir une surface de puits de plaque de microtitration avec de la nitrocellulose permet d'effectuer un test ELISA destiné à quantifier des prions pathogènes dans un échantillon suspect, en particulier après la digestion enzymatique de cet échantillon avec une enzyme de type protéinase K, en renforçant la liaison de prions pathogène et/ou en réduisant la liaison de prions cellulaires (non pathogènes).

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