High-affinity antibodies

Details High-affinity antibodies High-affinity antibodies

C - Chemistry, Metallurgy

07

K

C07K 16/00 (2006.01) A61K 47/48 (2006.01) C07K 16/30 (2006.01) C12N 15/13 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01)

Patent

CA 2340865

High-affinity monoclonal antibodies, wherein the affinity is characterised by: (i) incubating first and second samples of the antibody in antigen-coated microtitre plate wells at a concentration chosen to be within the linear part of a standard curve at pH 7.2 for 1 hour at 37 ~C; (ii) removing unbound antibody from both samples; (iii) incubating the first sample with PBS at pH 7.2 for 1 hour at 37 ~C, and reducing the pH of the second sample to pH 3 or below and incubating for 1 hour at 37 ~C; (iv) removing unbound antibody from both samples; (v) incubating both samples with anti-antibody alkaline phosphatase-conjugate for 1 hour at 37 ~C; (vi) removing unbound conjugate from both samples; and (vii) adding PNPP substrate to the samples, measuring the absorbance of the samples at 405 nm, and determining the amount of antibody bound to antigen, wherein the amount bound in the second sample is > 50 % of that of the first sample.

Cette invention se rapporte à des anticorps monoclonaux à forte affinité, cette affinité se caractérisant par les opérations suivantes: (i) on laisse incuber un premier et un second échantillon de l'anticorps dans les alvéoles d'une plaque de microtitration recouverte d'antigène, à une concentration choisie de façon à se situer dans la partie linéaire d'une courbe standard à un pH de 7,2 pendant 1 heure à 37 ·C; (ii) on retire des deux échantillons tout anticorps non lié; (iii) on laisse incuber le premier échantillon avec un soluté tampon de phosphate à un pH de 7,2 pendant une heure à 37 ·C, et on abaisse le pH du second échantillon jusqu'à atteindre un pH égal ou inférieur à 3, et on laisse incuber ce premier échantillon pendant 1 heure à 37 ·C; (iv) on retire des deux échantillons tout anticorps non lié; (v) on laisse incuber les deux échantillons avec un conjugué de phosphatase alcaline anti-anticorps pendant 1 heure à 37 ·C; Cvi) on retire des deux échantillons tout conjugué non lié; et (vii) on ajoute aux échantillon sun substrat PNPP, on mesure l'absorbance des échantillons à 405nm et on détermine la quantité d'anticorps liée à l'antigène, la quantité liée du second échantillon constituant plus de 50 % de celle du premier échantillon.

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Profile ID: LFCA-PAI-O-2014603