Composition for separating spermatozoa from a semen sample

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 5/076 (2010.01) A61D 19/02 (2006.01) A61K 35/52 (2006.01) A61P 15/00 (2006.01)

Patent

CA 2698988

The present invention relates to the field of veterinary medicine, more specifically to compositions and methods useful for processing animal semen for use in assisted reproduction. The invention relates to a composition for separation of spermatozoa from a semen sample, comprising at least one salt of an alkali metal and/or an alkaline earth metal, EDTA, a zwitterion buffer, silane-coated silica particles and water, said composition having a pH of 7.0- 7.35 and an osmolarity of 300-345 mOsm. Furthermore it relates to a method for preparing spermatozoa from a semen sample from a non-human animal, comprising the step of separating the spermatozoa from other semen constituents by centrifugation through a single layer of a colloid formulation. Preferably, the colloid formulation is the composition according to the invention. The invention also relates to a method for separating a sperm sub-population of interest from a semen sample from a non-human animal, comprising the steps of providing a density gradient comprising at least two layers of the composition of the invention, each layer having a different density;separating the sperm sub-populations in the semen sample by centrifugation through the density gradient; and selecting the sperm sub-population of interest. Finally, the invention relates to spermatozoa prepared with the methods of the invention and the use of such spermatozoa in artificial insemination, in vitro fertilisation or intracytoplasmic sperm injection.

La présente invention concerne le domaine de la médecine vétérinaire, plus spécifiquement des compositions et procédés utiles pour traiter un sperme animal pour une utilisation dans la procréation assistée. L'invention porte sur une composition pour la séparation des spermatozoïdes d'un échantillon de sperme, comprenant au moins un sel d'un métal alcalin et/ou d'un métal alcalino-terreux, l'EDTA, un tampon zwitterionique, des particules de silice revêtues de silane et de l'eau, ladite composition ayant un pH de 7,0-7,35 et une osmolarité de 300-345 mOsm. De plus, l'invention porte sur un procédé de préparation de spermatozoïdes à partir d'un échantillon de sperme provenant d'un animal non humain, comprenant l'étape consistant à séparer les spermatozoïdes des autres constituants du sperme par centrifugation à travers une seule couche d'une formulation colloïdale. De préférence, la formulation colloïdale est la composition selon l'invention. L'invention porte également sur un procédé pour séparer une sous-population de sperme d'intérêt d'un échantillon de sperme provenant d'un animal non humain, comprenant les étapes consistant à prendre un gradient de densité comprenant au moins deux couches de la composition de l'invention, chaque couche ayant une densité différente; séparer les sous-populations de sperme dans l'échantillon de sperme par centrifugation à travers le gradient de densité; et sélectionner la sous-population de sperme d'intérêt. Enfin, l'invention porte sur des spermatozoïdes préparés par les procédés de l'invention et sur l'utilisation de tels spermatozoïdes dans l'insémination artificielle, la fécondation in vitro ou l'injection de sperme intracytoplasmique.

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