C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/62 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12N 15/57 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) C12Q 1/34 (2006.01) C12Q 1/37 (2006.01) G01N 33/573 (2006.01)
Patent
CA 2454238
Methods and compositions for detecting the presence of an active protease in a cell are provided. A feature of the subject methods is that a protease detection fusion protein is employed to detect the protease activity of interest. The protease detection fusion protein includes first and second subcellular localization domains separated by a protease cleavage domain, where the first subcellular localization domain is dominant over the second. The protease detection fusion proteins employed in the subject methods are further characterized by having a label domain located between the protease cleavage and second subcellular localization domains. In practicing the subject methods, the protease detection fusion protein is first provided inside the cell to be assayed. Following a suitable incubation period, the subcellular location of the label domain is determined, where the location is indicative of whether or not the protease activity of interest is present in the cell. Also provided are systems and kits for use in practicing the subject methods. The subject invention finds use in a variety of different applications, including protease activity detection applications, drug screening applications, etc.
L'invention concerne des procédés et des compositions pour détecter la présence d'une protéase active dans une cellule. Les procédés selon l'invention sont caractérisés en ce qu'une protéine de fusion assurant la détection de la protéase est utilisée pour détecter l'activité de la protéase utile. Cette protéine de fusion assurant la détection de la protéase comprend des premier et deuxième domaines de localisation sous-cellulaire séparés par un domaine de clivage de la protéase, où le premier domaine de localisation sous-cellulaire est dominant par rapport au deuxième. Les protéines de fusion assurant la détection de la protéase utilisées dans ces procédés se caractérisent en outre en ce qu'elles présentent un domaine d'étiquette placé entre les domaines de clivage de la protéase et le deuxième domaine de localisation sous-cellulaire. Lors de la mise en oeuvre de ces procédés, la protéine de fusion assurant la détection de la protéase est d'abord fournie dans la cellule à tester. Après une période d'incubation appropriée, on détermine l'emplacement sous-cellulaire du domaine d'étiquette, et l'emplacement indique si l'activité de la protéase est présente ou non dans la cellule. L'invention concerne aussi des systèmes et des kits prévus pour mettre en oeuvre les procédés selon l'invention. L'invention présente une grande utilité pour de nombreuses applications, y compris pour la détection de l'activité de la protéase, les applications de dosage des médicaments, etc..
Clontech Laboratories Inc.
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2048475