In vitro activated gamma delta lymphocytes

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/07 (2006.01) C12N 5/06 (2006.01) C12N 15/01 (2006.01)

Patent

CA 2360046

Patients who develop increased numbers of .gamma..delta.+ cytotoxic T lymphocytes 2-6 months after allogeneic bone marrow transplantation are less likely to relapse than those who do not. The .gamma..delta.+ T cells isolated from blood of patients with increased .gamma..delta.+ T cells are CD3+CD4-CD8- CD57+, cytolytic to K562 cells, and express the V.delta.1 T cell receptor phenotype. Similar .gamma..delta.+ T cells can be generated in vitro by culture of donor mononuclear cells which are enriched for .gamma..delta.+ T cells by immunomagnetic depletion of depleted of CD4+ and CD8+ cells. This .gamma..delta.-enriched cell preparation was cultured on a combination of immobilized pan-.delta. monoclonal antibody and irradiated recipient B cell leukemia. After four weeks, the cultures were almost exclusively V.delta.1+CD3+CD4-CD8- cells that co-expressed activation-associated antigens CD69, CD25, and HLA-DR. Furthermore, they were cytolytic against the primary leukemia obtained from the recipient and lymphoblastic leukemia cell lines, yet had minimal cytotoxicity against normal donor-derived mononuclear cells or myeloid leukemia cell lines. These observations suggest that donor-derived cytotoxic .gamma..delta.+ T cells can be generated in vitro, and may provide therapeutic potential for prevention of disease relapse.

Les patients développant un nombre accru de lymphocytes T .gamma..delta.+ cytotoxiques 2 à 6 mois après une greffe allogène de moelles osseuse sont moins susceptibles de rechute que les autres. Les lymphocytes T .gamma..delta.+ isolés dans le sang de patient présentant plus de lymphocytes T .gamma..delta.+ sont les CD3+CD4-CD8-CD57+, qui sont cytolytiques pour les cellules K562 et expriment le phénotype récepteur V.delta.1 des lymphocytes T. Des lymphocytes T .gamma..delta.+ peuvent être obtenus in vitro par culture de cellules mononucléaires donneuses qui sont enrichies en lymphocytes T .gamma..delta.+ par déplétion immunomagnétique de CD4+ et CD8+ appauvris. Cette préparation cellulaire enrichie en .gamma..delta. a été cultivée sur une combinaison d'anticorps monoclonaux pan-.delta. immobilisés et de lymphocytes B leucémiques récepteurs irradiés. Après quatre semaines, les cultures étaient presque exclusivement des lymphocytes V.delta.1+CD3+CD4-CD8- qui exprimaient les antigènes CD69, CD25 and HLA-DR associés à l'activation. En outre, ils étaient cytolytiques par rapport à la leucémie primaire obtenue à partir des lignées cellulaires leucémiques réceptrices et lymphoblastes, tout en présentant une cytotoxicité minimale contre les cellules mononucléaires normales dérivées des donneuses ou contre les lignées de cellules leucémiques myéloïdes. Ces observations donnent à penser que les lymphocytes T .gamma..delta.+ cytotoxiques sont susceptibles de production in vitro et peuvent présenter un potentiel thérapeutique pour la prévention de la rechute.

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