C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2311952
A method for detecting the presence of a target nucleic acid sequence in a sample, said method comprising: (a) adding to a sample suspected of containing said target nucleic acid sequence, a probe specific for said target sequence and DNA duplex binding agent, said probe comprising a reactive molecule able to absorb fluorescence from or donate fluorescent energy to said DNA duplex binding agent, (b) subjecting the thus formed mixture to an amplification reaction in which target nucleic acid is amplified, (c) subjecting said sample to conditions under which the said probe hybridises to the target sequence, and (d) monitoring fluorescence from said sample. This method can be used for example to monitor amplification reactions such as PCR reactions, such that the amount of target sequence present in the sample may be determined. Additionally or alternatively, it may be used to generate duplex destabilisation data such as melt hysteris information for amplification monitoring or for detection and quantitation of polymorphisms or allelic variation, and so is useful in genetic diagnosis.
On décrit un procédé qui permet de détecter la présence d'une séquence cible d'acide nucléique dans un échantillon. Le procédé consiste a) ajouter à un échantillon présumé contenir ladite séquence cible d'acide nucléique une sonde spécifique pour cette séquence cible et un agent de liaison double à l'ADN, ladite sonde contenant une molécule réactive capable d'absorber la fluorescence émise par l'agent de liaison double à l'ADN, ou apporter à ce dernier de l'énergie fluorescente; b) soumettre le mélange ainsi formé à une réaction d'amplification pour amplifier l'acide nucléique cible; c) soumettre l'échantillon à des conditions dans lesquelles la sonde s'hybride avec la séquence cible; et d) surveiller la fluorescence émise par l'échantillon. Ce procédé peut s'utiliser, par exemple, pour surveiller des réactions d'amplification, telles que des réactions d'ACP, en vue de déterminer la quantité de la séquence cible présente dans l'échantillon. De plus, ou dans une forme de réalisation de remplacement, le procédé peut s'utiliser pour générer des données de destabilisation de duplex, telles que des informations d'hystérèse de fusion pour la surveillance de l'amplification ou pour la détection et l'évaluation quantitative de polymorphismes ou d'une variation allélique, et conviennent donc dans des méthodes de diagnostic génétique.
Fuerst Roderick
Lee Martin Alan
Bio/gene Limited
Fetherstonhaugh & Co.
The Secretary Of State For Defence
LandOfFree
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