C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2324249
The invention relates to a method for detecting a nucleotide sequence by means of a polymerase chain reaction, whereby the nucleotide sequence (N) is a constituent of a double stranded nucleic acid molecule which is located in a solution and which is comprised of a strand (S) and a counter-strand (G). The inventive method comprises the following steps: a) adding a first primer (P1) to the solution, whereby the first primer (P1) is complementary to a first segment (AtS) of the strand (S) located at the 5'-terminal of a central segment (AzS), and adding a second primer (P2) to the solution, whereby the second primer (P2) is complementary to a 5'-terminal second segment (AtG) of the counter-strand (G); b) bringing the solution into contact with a third primer (P3) whose 5'-terminal end is bound to a solid phase (M), whereby the third primer (P3) is complementary to the central segment (AzS) of the strand (S) containing the nucleotide sequence (N); c) closing a reaction vessel which contains said solution, and; d) repeated heating and cooling of the solution with the following steps: d1) heating to 92 ~C - 100 ~C, d2) cooling to 40 ~C - 60 ~C, d3) heating to 72 ~C - 75 ~C, and e) detecting the nucleic acid molecule during or after step with a closed reaction vessel.
Procédé de détection d'une séquence nucléotidique à l'aide de la PCR, ladite séquence nucléotidique (N) faisant partie d'une molécule d'acide nucléique à double brin, formée d'un brin (S) et d'un contre-brin (G), se trouvant dans une solution, qui comporte les étapes suivantes: (a) mélange de la solution avec une première amorce (P1), ladite première amorce (P1) étant complémentaire à un premier segment (AtS) se trouvant en position 5'-terminale d'un segment central du brin (S) et avec une deuxième amorce (P2), ladite deuxième amorce (P2) étant complémentaire à un deuxième segment (AtG) 5'-terminal du contre-brin (G), (b) mise en contact de la solution avec une troisième amorce (P3) dont l'extrémité 5'-terminale est liée à une phase solide (M), ladite troisième amorce (P3) étant complémentaire au segment central (AzS) du brin (S) contenant la séquence nucléotidique (N), (c) fermeture du récipient de réaction contenant la solution, (d) chauffe et refroidissement de la solution en alternance selon le modèle suivant: (d1) chauffe à 92 ·C - 100 ·C, (d2) refroidissement à 40 ·C - 60 ·C, (d3) chauffe à 72 ·C - 75 ·C et (e) détection de la molécule d'acide nucléique pendant ou après l'étape (d), le récipient de réaction étant fermé.
Fetherstonhaugh & Co.
November Aktiengesellschaft Gesellschaft Fur Molekulare Medizin
LandOfFree
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