C - Chemistry – Metallurgy – 07 – H
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
H
C07H 21/00 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2433634
The present invention provides a novel method for ligation of oligonucleotides containing 5'-phosphorothioates on complementary templates by the action of DNA ligases. This reaction is readily applied to the synthesis of a single stranded circular DNA containing a phosphorothioate directed ligation reaction by ATP dependent DNA ligase reaction is similar to conventional 5'-phosphate ligation. The utility of enzymatic ligation in probing specific sequences of DNA is also described. The present invention also provides a novel non- enzymatic ligation of 5'-phosphorothioates that has been applied to the synthesis of single strand phosphorothioate and phosphate circular DNA. A process for detecting the presence of a mismatch in an otherwise complementary pair of oligonucleotides is disclosed using an enzyme-based technique which shows the presence of a mismatch by failing to form a ligated single stranded DNA circle that can optionally be amplified using standard methods of rolling circle amplification.
L'invention concerne un nouveau procédé de ligature d'oligonucléotides contenant des 5'-phosphorothioates sur des matrices complémentaires, par l'action d'ADN ligases. Cette réaction est facilement appliquée à la synthèse d'un ADN monocaténaire circulaire contenant une liaison 5'-phosphorothioate au site de la jonction de ligature. L'efficacité de la réaction de ligature dirigée par 5'-phosphorothioate par une réaction d'ADN ligase dépendant d'ATP est semblable à la ligature de 5'-phosphate traditionnelle. L'invention concerne également l'utilité de la ligature enzymatique dans le sondage de séquences spécifiques d'ADN. L'invention concerne en outre une nouvelle ligature non enzymatique de 5'-phophorothioates appliquée à la synthèse d'ADN monocaténaire circulaire de phosphorothioate et de phosphate, ainsi qu'un procédé de détection de la présence d'un mauvais appariement d'une paire d'oligonucléotides habituellement complémentaire au moyen d'une technique à base d'enzymes qui montre la présence d'un mauvais appariement par l'impossibilité de former un cercle d'ADN monocaténaire ligaturé qui peut éventuellement être amplifié au moyen de procédés habituels d'amplification par cercle roulant.
Bandaru Rajanikanth
Kumar Gyanendra
Bandaru Rajanikanth
Kumar Gyanendra
Molecular Staging Inc.
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2009132