C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/62 (2006.01) C07K 14/195 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12N 15/86 (2006.01) C12Q 1/66 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/542 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)
Patent
CA 2335305
This invention provides bioluminescence resonance energy transfer (BRET) system that comprises four parts: 1) a bioluminescent protein that has luciferase activity; 2) an acceptor fluorophore that can accept the energy from the bioluminescent protein when they are associated, in the presence of the appropriate substrate; 3) a modulator that influences the proximity or the orientation of the bioluminescent protein and the fluorophore, and 4) an appropriate substrate to activate the luciferase activity of the bioluminescent protein. The components of this system interact to influence the spatial relationship between the bioluminescent protein and the fluorophore, that is demonstrated by the light emission from the system. The modulator can be a single entity, covalently attached to both the bioluminescent protein and the fluorophore, it can be two separate entities, each linked covalently to either the bioluminescent protein or the fluorophore, or an alternative configuration that falls within the scope of the invention. Thissystem can be used in both in vivo or in vitro assays to detect molecular changes in a wide variety of applications, and is amenable to automation. In particular, it is useful for assaying protein interactions, enzyme activities and the concentration of analytes or signaling molecules in cells or in solution.
L'invention concerne un système de transfert d'énergie de résonance par bioluminescence (BRET) constitué de quatre parties: 1) une protéine bioluminescente ayant une activité luciférase; 2) un fluorophore accepteur pouvant accepter l'énergie émanant de la protéine bioluminescente lorsqu'ils sont associés, en présence du substrat approprié; 3) un modulateur qui influence la proximité ou l'orientation de la protéine bioluminescente et du fluorophore; et 4) un substrat approprié pour déclencher l'activité luciférase de la protéine bioluminescente. Les composants de ce système interagissent pour influencer la relation spatiale entre la protéine bioluminescente et le fluorophore, ce que fait apparaître l'émission de lumière provenant du système. Le modulateur peut être une seule entité fixée de manière covalente à la fois à la protéine bioluminescente et au fluorophore; il peut aussi être deux entités distinctes liées chacune de manière covalente soit à la protéine bioluminescente soit au fluorophore; il peut enfin présenter une configuration substitutive ressortissant au domaine de l'invention. Ce système peut être utilisé dans des dosages in vivo ou in vitro pour détecter des modifications moléculaires dans de nombreuses applications, et se prête à l'automatisation. Le système convient en particulier pour analyser des interactions protéiques, des activités enzymatiques ou la concentration de substances à analyser ou de molécules marqueurs dans des cellules ou dans une solution.
Johnson Carl H.
Joly Erik
Piston David W.
Biosignal Packard Inc.
Mbm Intellectual Property Law Llp
Vanderbilt University
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1496779