A construct capable of release in closed circular form from...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

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C12N 15/09 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) C12N 15/79 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01)

Patent

CA 2404471

The present invention relates generally to constructs and in particular genetic constructs comprising polynucleotide sequences capable of release in covalently closed, circular form from a larger nucleotide sequence such as, but not limited to, a genome of a eukaryotic cell. Preferably, once released, a polynucleotide sequence is reconstituted in a form which permits expression of the polynucleotide sequence. In one embodiment, the reconstituted polynucleotide sequence comprises a coding sequence with all or part of an extraneous nucleotide such as, but not limited to, intronic sequence or other splice signal inserted therein. Expression and in particular transcription of the coding sequence involves splicing out the extraneous sequence. The release and circularization is generally in response to a stimulus such as a protein-mediated stimulus. More particularly, the protein is a viral or prokaryotic or eukaryotic derived protein or developmentally and/or tissue specific regulated protein. The construct of the present invention is particularly useful in conferring genetic resistance against pathogens or inducing apoptosis or other cell death mechanisms useful, for example, in treating cancer or inducing male or female sterility in plants. The constructs permit, therefore, site specific expression and/or developmentally regulated expression of selected genetic sequences.

L'invention concerne en règle générale des constructions, et en particulier des constructions génétiques comprenant des séquences polynucléotidiques capables de libération en forme circulaire, fermée par covalence, à partir d'une séquence nucléotidique plus grande telle que, entre autres, un génome d'une cellule eucaryote. Une fois libérée, une séquence polynucléotidique est de préférence reconstituée en une forme qui permet l'expression de celle-ci. Dans un mode de réalisation, la séquence polynucléotidique reconstituée comprend un séquence codante avec la totalité ou une partie d'une nucléotide extérieure telle que, entre autres, une séquence intronique ou un autre signal de jonction inséré dans celle-ci. L'expression, notamment la transcription, de la séquence codante implique la sortie de la séquence extérieure. La libération et la circularisation répondent généralement à un stimulus, tel qu'un stimulus induit par une protéine. Plus particulièrement, la protéine est d'origine virale, procaryote ou eurocaryote ou c'est une protéine à régulation spécifique de tissu et/ou de développement. La construction génétique de la présente invention s'avère particulièrement utile pour conférer une résistance génétique envers des agents pathogènes ou pour induire une apoptose ou un autre mécanisme de mort cellulaire utile, par exemple, dans le traitement du cancer ou dans la stérilisation mâle ou femelle des plantes. Ladite construction génétique permet ainsi l'expression spécifique du milieu et/ou l'expression à régulation de développement de séquences génétiques sélectionnées.

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