C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 21/00 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01)
Patent
CA 2414775
A method for expressing proteins as a fusion chimera with a domain of p26 or alpha crystallin type proteins to improve the protein stability and solubility when over expressed in bacteria such as E. Coli is provided. Genes of interest are cloned into the multiple cloning site of the pROTECT Vector System just downstream of the p26 or alpha crystallin type protein and a thrombin cleavage site. Protein expression is driven by a strong bacterial promoter (TAC). The expression is induced by the addition of 1mMIPTG that overcomes the lac repression (lac Iq). The soluble recombinant protein is purified using a fusion tag.
L'invention concerne une méthode servant à exprimer des protéines en tant que chimère de fusion présentant un domaine protéique de type p26 ou alpha-crystallin, destinée à améliorer la stabilité et la solubilité des protéines lorsqu'elles sont exprimées excessivement dans des bactéries telles que E. Coli. Des gènes d'intérêt sont clonés dans le site de clonage multiple du système vectorette pROTECT juste en aval de la protéine de type p26 ou alpha-crystallin et d'un site de clivage de thrombine. L'expression protéique est effectuée par un puissant promoteur bactérien (TAC). Cette expression est induite par l'addition de 1mMIPTG qui surmonte la répression de lac (lac I¿q?). La protéine recombinante soluble est purifiée au moyen d'un fragment de fusion.
Borden Ladner Gervais Llp
Eci Biotech Inc.
Expressive Constructs Inc.
LandOfFree
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