C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/48 (2006.01)
Patent
CA 2598726
A method and assay kit for determination of thymidine kinase (TK) activity in a biological sample, such as blood, serum, plasma, Cerebral Spinal Fluid (CSF), pleural fluid, ascites, tissues, cells and extracts thereof, is described. The method comprises contacting, in a buffer, a Basic Reaction Mixture comprising: solid surface-attached primer and/or template, a modified deoxy nucleoside, such as BromodeoxyUridine, IododeoxyUridine, Fluorodeoxy- Uridine or VinyldexoyThymidine as a kinase enzyme substrate, a phosphate donor, a nucleotide polymerizing enzyme, and a kinase enzyme source devoid of TK activity, such as a yeast extract, with the biological sample. After incubation the amount of modified deoxy nucleoside that has been incorporated into the solid surface-attached primer and/or template, is determined and the TK activity present in the biological sample is directly proportional to the amount of incorporated modified deoxy nucleoside. The method and assay kit are useful in the diagnosing, prognosis monitoring of disease progression and treatment effects of cell-proliferation disorders or diseases, such as cancer, and in the screening of compounds, e.g. new drug candidates, affecting enzymatic pathways, which may obstruct the formation of thymidine phosphates or interfere with nucleic acid synthesis.
L'invention porte sur une méthode et sur une trousse de bioessais permettant de déterminer l'activité de la thymidine kinase (TK) dans un échantillon biologique tel que du sang, du sérum, du plasma, du liquide cérébro-spinal, du liquide pleural, des ascites, des tissus, des cellules, et leurs extraits. La méthode consiste à mettre en contact dans un tampon avec l'échantillon biologique, un mélange réactif de base comprenant: une amorce et/ou une matrice solide fixée à la surface, un désoxynucléoside modifié tel que la Bromodésoxy-Uridine, la Iododésoxy-Uridine, la Fluorodésoxy-Uridine ou la Vinyldésoxy-Thymidine, en tant que substrat de la kinase, un donneur de phosphate, une enzyme de polymérisation d'un nucléotide, et une source de kinase exempte d'activité de TK telle qu'un extrait de levure. Après incubation, on détermine la quantité de désoxynucléoside modifié incorporé à l'amorce et/ou la matrice solide fixée à la surface, l'activité de la TK présente dans l'échantillon biologique étant directement proportionnelle à cette quantité. La méthode et le bio-essai peuvent servir au diagnostic et à l'établissement de pronostics sur la progression, et les effets du traitement, de troubles et maladies à prolifération cellulaire tels que le cancer, et au criblage de composés tels que de nouveaux médicaments candidats intervenant dans des mécanismes enzymatiques, et pouvant empêcher la formation des thymidine phosphates ou interférer avec la synthèse des acides nucléiques.
Fetherstonhaugh & Co.
Ronnerbol Holding Ab
Ronnerbol International Ab
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1549633