G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/50 (2006.01) C12Q 1/25 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) G01N 33/533 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)
Patent
CA 2286293
Cells are generically modified to expresss a luminophore, e.g., a modified (F64L, S65T, Y66H) Green Fluorescent Protein (GFP, EGFP) coupled to a component of an intracellular signalling pathway such as a transcription factor, a cGMP- or cAMP-dependent protein kinase, a cyclin-, calmodulin- or phospholipid-dependent or mitogen-activated serine/threonin protein kinase, a tyrosine protein kinase, or a protein phosphatase (e.g. PKA, PKC, Erk, Smad, VASP, actin, p38, Jnk1, PKG, IkappaB, CDK2, Grk5, Zap70, p85, protein-tyrosine phosphatase 1C, Stat5, NEAT, NFkappaB, RhoA, PKB). An influence modulates the intracellular signalling pathway in such a way that the luminophore is being redistributed or translocated with the component in living cells in a manner experimentally determined to be correlated to the degree of the influence. Measurement of redistribution is performed by recording of light intensity, fluorescence lifetime, polarization, wavelength shift, resonance energy transfer, or other properties by an apparatus consisting of e.g. a fluorescence microscope and a CCD camera. Data stood as digital images are processed to numbers representing the degree of redistribution. The method can be used as a screening program for identifying a compound that modulates a component and is capable of treating a disease related to the function of the component.
Des cellules sont génétiquement modifiées de sorte qu'elles expriment un luminophore, p. ex. une protéine fluorescente verte (GFP, EGFP) modifiée (F64L, S65T, Y66H), couplée à un composant d'une voie de signalisation intracellulaire, tel un facteur de transcription, une protéine kinase GMPc ou AMPc dépendante, une sérine/thréonine kinase dépendante de cycline, de calmoduline, ou de phospholipide ou activée par mitogène, une tyrosine kinase, ou une protéine phosphatase (p. ex. PKA, PKC, Erk, Smad, VASP, actine, p38, Jnk1, PKG, IkappaB, CDK2, Grk5, Zap70, p85, protéine-tyrosine phosphatase 1C, Stat5, NFAT, NFkappaB, RhoA, PKB). Une influence permet de moduler la voie de signalisation intracellulaire de telle sorte que le luminophore est redistribué ou transloque avec le composant dans des cellules vivantes de façon déterminée expérimentalement, en vue d'une corrélation avec le degré de l'influence. On mesure la redistribution en enregistrant l'intensité lumineuse, la durée de vie de fluorescence, la polarisation, le déplacement de longueur d'onde, le transfert d'énergie de résonance ou d'autres propriétés à l'aide d'un appareil constitué, p. ex., d'un microscope à fluorescence et d'une caméra à CCD. Des données stockées sous forme d'images numériques sont traitées afin d'obtenir des nombres représentant le degré de redistribution. Le procédé peut être utilisé comme programme de criblage permettant d'identifier un composé modulant un composant, et capable de traiter une maladie liée à la fonction du composant.
Almholt Kasper
Arkhammer Per Olof Gunnar
Bjorn Sara Petersen
Scudder Kurt
Terry Bernard Robert
Bioimage A/s
Fisher Bioimage Aps
Sim & Mcburney
LandOfFree
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