C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/00 (2006.01) C12N 1/15 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 5/00 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2546502
[PROBLEMS] To provide a double-stranded DNA for amplifying a gene at a high speed and a method of amplifying a gene and a method of producing a protein using the same. [MEANS FOR SOLVING PROBLEMS] A system of artificially amplifying a gene at a high speed based on the gene replication (BIR: break- induced replication) system in vivo is constructed. High-speed gene amplification is triggered by transferring a double-stranded DNA having the sequences A-B-C and A~-B~-C~ or the reverse sequence of A~-B~-C~ (wherein A and A~ represent double-stranded DNA fragments capable of undergoing homologous recombination with each other one of which has a sequence reverse to the other; B and B~ represent amplification parts at least one of which contains a gene to be amplified; and C and C~ represent double-stranded DNA fragments capable of undergoing homologous recombination with each other one of which has a sequence reverse to the other; provided that an arbitrary DNA sequence may be inserted between them and B and B~ may be omitted (in this case, A or C may serve as a gene to be amplified) into a chromosome or a plasmid, and inducing the expression of an enzyme which arbitrarily cleaves a specific sequence so as to cause the occurrence of cleavage at a specific site.
L'invention concerne la réalisation d'un ADN à double brin pour amplifier un gène à grande vitesse, une méthode d'amplification génique et un procédé pour produire une protéine en conséquence. Un système est élaboré pour amplifier artificiellement un gène à grande vitesse, sur la base du système de réplication génétique par cassure (BIR) in vivo. L'amplification génique à grande vitesse est induite par le transfert d'un ADN à double brin comportant les séquences A-B-C et A'-B'-C' ou la séquence inverse de A'-B'-C'. A et A' représentent des fragments d'ADN à double brin aptes à subir une recombinaison homologue mutuelle, l'un ayant une séquence inverse à l'autre. B et B' représentent des éléments d'amplification dont un au moins contient un gène à amplifier. C et C' représentent des fragments d'ADN à double brin aptes à subir une recombinaison homologue mutuelle, l'un ayant une séquence inverse à l'autre. Selon l'invention, une séquence ADN arbitraire peut être insérée entre eux, B et B' peuvent être éliminés (auquel cas A ou C joue le rôle de gène à amplifier) en un chromosome ou en un plasmide, et l'induction de l'expression d'une enzyme divise arbitrairement une séquence spécifique pour provoquer une division en un site spécifique.
Horiuchi Takashi
Watanabe Takaaki
Japan Science And Technology Agency
Marks & Clerk
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1650306