A method for identifying protein-protein interactions

Details A method for identifying protein-protein interactions A method for identifying protein-protein interactions

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/10 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2483936

The properties of yeast help, a type I ER membrane protein which is involved in the unfolded protein response (UPR), have been exlpoited to develop â. system for the detection and study of interactions between extracellular and/or membrane proteins. In the system, proteins of interest are fused to the lumenal N-terminus of a truncated Irelp. A specific interaction between two partners may be visualized through dimerization of the Irelp moiety which, either. directly or indirectly, results in a detection means, for example, the expression of a selectable reporter gene. Depending on the type of reporter gene used, its expression can positively or negatively influence cell growth, thus allowing selection of both stimulation and inhibition of protein-protein interactions. The system presented here can also be used to study intracellular protein interactions.

On a exploité les propriétés d'une Ire1p de levure qui est une protéine membranaire ER de type I impliquée dans la réponse de la protéine dépliée (UPR), pour mettre au point un système de détection et d'étude des interactions entre des protéines extracellulaires et/ou membranaires. Dans ce système, les protéines concernées sont fusionnées au terminal N d'un Irelp tronqué. Une interaction spécifique entre deux partenaires peut être visualisée par dimérisation du fragment Irelp qui, directement ou indirectement, produit dans le système de détection, l'expression d'un gène reporteur sélectionnable, par exemple. Selon le type de gène reporteur utilisé, son expression peut influencer positivement ou négativement la croissance cellulaire, ce qui permet ainsi de sélectionner aussi bien la stimulation que l'inhibition des interactions protéine-protéine. Ce système peut également être utilisé pour étudier les interactions des protéines intracellulaires.

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