C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01)
Patent
CA 2510179
The invention relates to the fields of biochemistry, molecular biology, and pharmacology. More specifically the present invention relates to the production of proteins in a (host) cell. The present invention uses a TRAnscription Pause (TRAP) sequence to enhance a protein expression characteristic of a protein expression unit. The TRAP sequence is thought to at least in part prevent formation of antisense RNA or to at least in part prevent transcription to enter said protein expression unit. In one embodiment, the invention provides a method for expression of at least one protein of interest in a cell comprising providing said cell with at least one protein expression unit which unit comprises a promoter functionally linked to an open reading frame encoding said at least one protein of interest, characterised in that said protein expression unit further comprises at least one TRAnscription Pause (TRAP) sequence and wherein said TRAP sequence is functionally located downstream of said open reading frame and at least in part prevents formation of antisense RNA. In yet another embodiment said TRAP sequence is functionally located upstream of said promoter and at least in part prevents transcription to enter said expression unit. Preferably, the expression protein unit further comprises at least one STabilizing Anti- Repressor (STAR) sequence.
L'invention concerne les domaines de la biochimie, de la biologie moléculaire et de la pharmacologie. L'invention concerne plus particulièrement la production de protéines dans une cellule (hôte). L'invention utilise une séquence TRAP (pause de la transcription) afin d'augmenter une caractéristique d'expression de protéine d'une unité d'expression de protéine. La séquence TRAP est supposée, au moins en partie, empêcher la formation d'ARN antisens, ou, au moins en partie, empêcher la transcription de pénétrer dans ladite unité d'expression de protéine. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé d'expression d'au moins une protéine d'intérêt dans une cellule, qui consiste à doter ladite cellule d'une unité d'expression de protéine comprenant un promoteur fonctionnellement lié à une phase de lecture ouverte codant au moins ladite protéine d'intérêt, caractérisé en ce que ladite unité d'expression de protéine comprend en outre au moins une séquence TRAP, cette dernière étant fonctionnellement située en aval par rapport à ladite phase de lecture ouverte, et empêchant, au moins en partie, la formation d'ARN antisens. Dans un autre mode de réalisation, ladite séquence TRAP est fonctionnellement située en amont par rapport audit promoteur, et empêche, au moins en partie, la transcription de pénétrer dans ladite unité d'expression de protéine. De préférence, ladite unité d'expression de protéine comprend en outre une séquence d'anti-répresseur de stabilisation (STAR).
Otte Arie Pieter
Van Blokland Henricus Johannes Maria
Borden Ladner Gervais Llp
Chromagenics B.v.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1600940