A method for in vitro molecular evolution of protein function

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 15/10 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2430582

The invention provides a method for generating a polmucleotide sequence or population of sequences fromparent single stranded polynucleotide sequences encoding one or more protein motifs, comprising the steps of a) providing single stranded DNA constituting plus and minus strands of parent polynucleotide sequences; b) digesting the single stranded polynucleotide sequences with an exonuclease to generate populations of single stranded fragments; c) contacting said fragments generated from the plus strands with fragments generated from the minus strands and optionally, adding primer sequences that anneal to the 3' and 5' ends of at least one of the parent polynucleotides under annealing conditions; d) amplifying the fragments that anneal to each other to generate at least one polynucleotide sequence encoding one or more protein motifs having altered characteristics as compared to theone or more protein motifs encoded by said parent polynucleotides. Preferably, the exonuclease is BAL 31.

L'invention concerne un procédé permettant de générer une séquence polynucléotidique ou une population de séquences à partir de séquences polynucléotidiques parents monocaténaires codant au moins un motif protéinique. Ce procédé comprend les étapes consistant a) à utiliser un ADN monocaténaire constituant des brins positifs et négatifs de séquences polynucléotidiques parents; b) à faire digérer les séquences polynucléotidiques monocaténaires au moyen d'une exonucléase, de manière générer des populations de fragments monocaténaires; c) à mettre en contact les fragments générés à partir des brins positifs avec des fragments générés à partir des brins négatifs et éventuellement, à ajouter des séquences d'amorce s'hybridant aux extrémités 3' et 5' d'au moins un des polynucléotides parents dans des conditions d'hybridation; d) à amplifier les fragments s'hybridant les uns aux autres, de manière à générer au moins une séquence polynucléotidique codant un ou plusieurs motifs protéiniques présentant des caractéristiques modifiées comparativement aux motifs protéiniques codés par les polynuléotides parents. De préférence, l'exonucléase est BAL 31.

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