C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/72 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01)
Patent
CA 2610391
The present invention relates to the recombinant method used for the production of soluble form of human tissue plasminogen activator variant. In this variant the threonine at position 103 of the endogenous tissue plasminogen activator is replaced by an asparagine leading to a new glycosylation site. At position 117 of the endogenous tissue plasminogen activator asparagine has been replaced by glutamine, leading to the removal of an N linked glycosylation site. At position 296-299 the amino acids lysine, histidine, arginine, and arginine have been replaced by four alanine amino acids. The invention further relates to the de novo synthesis of the nucleic acid sequence encoding tissue plasminogen activator, transformation of the constructed nucleic acid sequences into competent bacteria and sub-cloning of the same into mammalian expression vectors for the expression of the desired protein. DNA constructs comprising the control elements associated with the gene of interest have been disclosed. The recombinant human tissue plasminogen activator, according to the invention, and the salts and functional derivatives thereof, may comprise the active ingredient of pharmaceutical compositions for treatment of treatment of heart attack and stroke patients. These compositions are yet another aspect of the present invention.
La présente invention concerne une méthode recombinante utilisée pour la production d'une forme soluble d'un variant de l'activateur tissulaire du plasminogène humain. Dans ce variant, la thréonine située à la position 103 de l'activateur tissulaire du plasminogène endogène est remplacée par une asparagine conduisant à un nouveau site de glycosylation. A la position 117 de l'activateur tissulaire du plasminogène endogène, l'asparagine a été remplacée par la glutamine, aboutissant à l'élimination du site de glycosylation à liaison N. Aux positions 296 à 299, la lysine des acides aminés, l'histidine, l'arginine, et l'arginine ont été remplacées par quatre acides aminés alanine. L'invention concerne également la synthèse de novo de la séquence d'acide nucléique codant l'activateur tissulaire du plasminogène; la transformation des séquences d'acide nucléique obtenues en bactéries compétentes; et le sous-clonage desdites séquences en vecteurs d'expression mammaliens destinés à exprimer la protéine désirée. On décrit en outre des constructions d'ADN comprenant les éléments régulateurs associés au gène d'intérêt. Selon l'invention, l'activateur tissulaire du plasminogène humain recombinant et les sels et dérivés fonctionnels de l'activateur peuvent comprendre l'ingrédient actif des compositions pharmaceutiques destinées au traitement de malades victimes d'une crise cardiaque ou d'un accident vasculaire cérébral.
Avestha Gengraine Technologies Pvt Ltd.
Avesthagen Limited
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