A method of amplification of a circularised nucleic acid probe

Details A method of amplification of a circularised nucleic acid probe A method of amplification of a circularised nucleic acid probe

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2394800

A method for amplifying a circular nucleic acid probe produced following interaction of a nucleic acid probe with a target sequence whereby the circular nucleic acid probe is enriched prior to amplification. Enrichment reduces the level of background amplification by removing any linear nucleic acid probes, and may be enzymatic or non-enzymatic. Amplification may be by rolling circle amplification. The probe may be a padlock probe. The terminal sequences of the probe may form non-contiguous duplexes with the probe circularised through ligation of a capture ligand or spacer nucleic acid molecule between the two terminal sequences. The capture ligand or spacer nucleic acid molecule may be labelled, such as with biotin. The method is used in applications involving the detection of specific nucleic acid sequences.

Cette invention concerne un procédé d'amplification d'une sonde d'acide nucléique circulaire qui est produite suite à une interaction entre une sonde d'acide nucléique et une séquence cible, ladite sonde d'acide nucléique circulaire étant enrichie avant son amplification. L'enrichissement permet de réduire le niveau d'amplification de fond en éliminant toutes les sondes d'acide nucléiques linéaires, et peut en outre être enzymatique ou non enzymatique. L'amplification peut consister en une amplification de cercle rotative, tandis que la sonde peut consister en une sonde cadenas. Les séquences terminales de la sonde peuvent former des duplex non contigus, la sonde étant circularisée par ligature d'un ligand de capture ou d'une molécule d'acide nucléique d'espacement entre les deux séquences terminales. Le ligand de capture ou la molécule d'acide nucléique d'espacement peuvent en outre être marqués, par exemple par de la biotine. Ce procédé peut être utilisé lors d'applications visant à détecter des séquences d'acide nucléique spécifiques.

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