C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/12 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12N 15/65 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/533 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01)
Patent
CA 2217700
The present invention relates to a method of detecting a biologically active substance affecting intracellular processes, the method comprising: (a) culturing a cell containing a DNA sequence coding for (i) a green fluorescent protein (GFP) having a protein kinase recognition site, or (ii) a green fluorescent protein wherein one or more amino acids have been substituted, inserted or deleted to provide a binding domain of a second messenger or an enzyme recognition site, or (iii) a hybrid polypeptide of green fluorescent protein (GFP) or a modified GFP and an enzyme recognition site or a binding domain for a second messenger under conditions permitting expression of the DNA sequence; (b) measuring the fluorescence of the cell; (c) incubating the cell with a sample suspected of containing a biologically active substance affecting intracellular processes; and (d) measuring the fluorescence produced by the incubated cell and determining any change in the fluorescence compared to the fluorescence measured in step (b), such change being indicative of the presence of a biologically active substance in said sample.
La présente invention décrit un procédé qui permet de détecter une substance biologiquement active modifiant des processus intracellulaires. Ce procédé consiste à: a) mettre en culture une cellule contenant une séquence d'ADN codant pour (i) une protéine fluorescente verte comprenant un site de reconnaissance de protéine kinase, ou (ii) une protéine fluorescente verte dans laquelle un ou plusieurs acides aminés ont été substitués, insérés ou supprimés de sorte qu'un domaine de liaison d'un deuxième messager ou un site de reconnaissance enzymatique soit produit, ou (iii) un polypeptide hybride de protéine fluorescente verte ou une protéine fluorescente verte modifiée et un site de reconnaissance enzymatique ou un domaine de liaison pour un deuxième messager dans des conditions permettant d'exprimer la séquence d'ADN; b) mesurer la fluorescence de la cellule; c) mettre la cellule en incubation avec un échantillon suspecté de contenir une substance biologiquement active modifiant les processus intracellulaires; et d) mesurer la fluorescence produite par la cellule ayant subi l'incubation et repérer toute modification de la fluorescence par rapport à celle mesurée dans l'étape b), cette modification signalant la présence d'une substance active biologiquement dans ledit échantillon.
Bjorn Sara Petersen
Poulsen Lars Kongsbak
Thastrup Ole
Tullin Soren
Fisher Bioimage Aps
Mccarthy Tetrault Llp
Novo Nordisk A/s
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1365675