C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/62 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01)
Patent
CA 2462598
The present invention relates to a 3-part hybrid system for detection protein interactions in live mammalian cells and screening for compounds modulating such interactions. The method is fully compatible with HTS. The three hybrids are a first heterologous conjugate comprising an anchor protein that specifically binds to an internal structure within the cell conjugated to an interactor protein of type A, a second heterologous conjugate comprising an interactor protein of type B conjugated to the first protein of interest, a third heterologous conjugate comprising a second protein of interest conjugated to a detectable group. When applying a dimerizer compound, interactor proteins A and B bind to each other and if the two proteins of interest interact, the distribution of the detectable group will mimic the distribution of the anchor protein. However, if there is no interaction, the distribution of the detectable group will mimic the distribution of the second protein of interest.
La présente invention concerne un système hybride à 3 parties permettant la détection d'interactions protéiques dans des cellules de mammifères vivantes et le criblage de composés modulant lesdites interactions. Ladite méthode est parfaitement compatible avec le criblage à haut débit. Les trois hybrides sont un premier conjugué hétérologue comprenant une protéine de fixation qui se fixe de manière spécifique à une structure interne présente dans la cellule conjuguée à une protéine d'interaction de type A, un deuxième conjugué hétérologue comprenant une protéine d'interaction de type B conjuguée à la première protéine à étudier, un troisième conjugué hétérologue comprenant une seconde protéine à étudier conjuguée à un groupe détectable. Lors de l'application d'un composé de dimérisation, les protéines d'interaction A et B se fixent les unes aux autres et si les deux protéines à étudier interagissent, la répartition du groupe détectable imite celle de la protéine de fixation. Cependant, s'il n'existe pas d'interaction, la répartition du groupe détectable imite celle de la seconde protéine à étudier.
Nielsen Soeren Jensby
Terry Bernard Robert
Bioimage A/s
Fisher Bioimage Aps
Sim & Mcburney
LandOfFree
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