A method of dna amplification

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2700233

The present invention relates generally to a method of amplifying a nucleic acid region of interest and, more particularly, to a method of amplifying a nucleic acid region of interest using a PCR method designed to minimise the generation of amplicons from primers which have bound to nucleic acid regions other than the specific region of interest. The method of the present invention is based on the determination that by rendering inefficient the functionality of either the forward primer or the reverse primer, the rate of amplification of irrelevant nucleic acid regions can be reduced relative to amplification of the region of interest. The provision of a selective means of amplifying a nucleic acid region of interest is useful in a range of applications including, but not limited to, the diagnosis and/or monitoring of disease conditions which are characterised by specific gene sequences, the characterisation or analysis of gene regions of interest, the identification or characterisation of DNA breakpoint regions and the isolation of gene sequences of interest where only the nucleotide sequence at one end of the gene sequence of interest is known.

L'invention concerne de manière générale un procédé d'amplification d'une région d'acide nucléique voulue, et plus particulièrement un procédé d'amplification d'une région d'acide nucléique voulue à l'aide d'un procédé de PCR conçu pour réduire la génération d'amplicons à partir d'amorces ayant été liées à des régions d'acide nucléique autres que la région spécifique voulue. Le procédé de l'invention est basé sur le fait qu'en rendant inefficace la fonctionnalité de l'amorce sens ou de l'amorce antisens, on peut réduire le taux d'amplification de régions d'acide nucléique non pertinent par rapport à l'amplification de la région voulue. Des moyens sélectifs d'amplification d'une région d'acide nucléique voulue sont utiles dans diverses applications comprenant notamment, mais pas exclusivement, le diagnostic et/ou la surveillance d'états pathologiques caractérisés par des séquences de gène spécifiques, la caractérisation ou l'analyse de régions de gène voulues, l'identification ou la caractérisation de régions de point de cassure de l'ADN et l'isolement de séquences de gène voulues, dans lesquelles on ne connaît que la séquence nucléotidique se situant à une extrémité de la séquence de gène voulue.

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