C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2561353
A method of genotyping blood cell antigens comprising subjecting DNA from an individual of a mammalian species to a multiplex Polymerase Chain Reaction (PCR) to amplify and detectably label a region of the locus of at least two different blood cell antigens which contains the site of nucleotide polymorphism of said blood cell antigen and using the thus amplified and labeled DNA fragments to determine the genotype for each of said blood cell antigens. The multiplex PCR comprises the use of at least one pair of blood cell antigen-specific chimeric primers for each blood cell antigen to be genotyped and at least one detectably labeled universal primer, preferably a pair of detectably labeled universal primers. The universal primer(s) have a unique sequence not occurring in the DNA of said mammalian species. Each chimeric primer pair comprises a left chimeric primer and a right chimeric primer, each of them comprising a blood cell antigen-specific part at the 3' end and a universal part at the 5' end. The base sequence of the universal part of the chimeric primers corresponds to the base sequence of said at least one universal primer. The blood cell antigen-specific parts of the chimeric primer pair enclose a region of the locus of the blood cell antigen which contains the site of nucleotide polymorphism of said blood cell antigen. A kit for genotyping blood cell antigens by this method. A set of blood cell antigen- specific chimeric primer pairs and a set of blood cell antigen allele-specific oligonucleotide probes.
Méthode de génotypage d'antigènes de cellules sanguines consistant à soumettre l'ADN d'un individu d'espèce mammifère à une réaction en chaîne de polymérase multiplexe (PCR) afin d'amplifier et de marquer de façon détectable une zone du locus d'au moins deux différents antigènes de cellules sanguines contenant le site de polymorphisme de nucléotide dudit antigène et à utiliser ces fragments d'ADN amplifiés et marqués afin de déterminer le génotype de chacun desdits antigènes de cellules sanguines. La PCR multiplexe consiste à utiliser au moins une paire d'amorces chimères spécifiques pour l'antigène de cellules sanguines pour chaque antigène à génotyper et au moins une amorce universelle marquée de façon détectable, de préférence, une paire d'amorces universelles marquées de façon détectable. Cette ou ces amorces universelles possèdent une séquence unique n'apparaissant pas dans l'ADN de ladite espèce mammifère. Chaque paire d'amorces chimères comprend une amorce chimère gauche et une amorce chimère droite, dont chacune possède une partie spécifique pour l'antigène de cellules sanguines au niveau de l'extrémité 3' et une partie universelle au niveau de l'extrémité 5'. La séquence de base de la partie universelle de ces amorces chimères correspond à la séquence de base de ladite amorce universelle. Les parties spécifiques pour l'antigène de cellules sanguines de la paire d'amorces chimères entourent une région du locus de l'antigène de cellules sanguines contenant le site de polymorphisme de nucléotide dudit antigène. L'invention concerne également une trousse servant à génotyper des antigènes de cellules sanguines au moyen de ce procédé. Elle concerne également un ensemble de paires d'amorces chimères spécifiques pour l'antigène des cellules sanguines et un ensemble de sondes d'oligonucléotide spécifiques pour l'allèle de cet antigène.
Beiboer Sigrid Herma Wilma
de Haas Maschenka
Den Dunnen Johannes Theodorus
Wieringa-Jelsma Hendrika
Borden Ladner Gervais Llp
Stichting Sanquin Bloedvoorziening
LandOfFree
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