C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01)
Patent
CA 2436214
We describe here an in vitro method of increasing complementarity in a heteroduplex polynucleotide sequence. The method uses annealing of opposite strands to form a polynucleotide duplex with mismatches. The heteroduplex polynucleotide is combined with an effective amount of enzymes having strand cleavage activity, 3' to 5' exonuclease activity, and polymerase activity, and allowing sufficient time for the percentage of complementarity to be increased within the heteroduplex. Not all heteroduplex polynucleotide will necessarily have all mismatches resolved to complementary. The resulting polynucleotide is optionally ligated. Several variant polynucleotide result. At sites where either of the opposite strands has templated recoding in the other strand, the resulting percent complementarity of the heteroduplex polynucleotide sequence is increased. The parent polynucleotides need not be cleaved into fragments prior to annealing heterologous strands. Therefore, no reassembly is required.
L'invention concerne un procédé in vitro destiné à améliorer la complémentarité d'une séquence polynucléotidique hétéroduplex. Ce procédé consiste à hybrider des brins opposés afin de former un polynucléotide duplex avec des mésappariements. Le polynucléotide hétéroduplex est combiné avec une quantité efficace d'enzymes possédant une activité de clivage de brin, une activité exonucléase de 5' en 3', et une activité polymérase, et laissant un temps suffisant pour accroître le pourcentage de complémentarité dans l'hétéroduplex. Tous les polynucléotides hétéroduplex n'auront pas tous leurs mésappariements résolus à la complémentarité. Le polynucleotide qui en résulte est éventuellement ligaturé. Plusieurs polynucleotides différents en résultent. Aux endroits où l'un des brins opposés calibre le recodage dans l'autre brin, la complémentarité de pourcentage résultante de la séquence polynucléotidique hétéroduplex est augmentée. Les polynucleotides parents doivent être clivés en fragments avant l'hybridisation des brins hétérologues. C'est pourquoi le réassemblage n'est pas nécessaire.
Fitzmaurice Wayne P.
Lindbo John A.
Padgett Hal S.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Large Scale Biology Corporation
Novici Biotech Llc
LandOfFree
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