C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/18 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C07K 14/50 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C12N 15/73 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01)
Patent
CA 2419338
The gene of human acidic fibroblast growth factor 155 (haFGF 155) has been obtained by chemical synthesis. The nucleotide sequence of haFGF 155 gene has been deduced on the basis of haFGF 155 amino acid sequence as described in the literature. The amino acid sequence of the synthesized haFGF 155 does not differ from those described in the literature. The nucleotide sequence of haFGF gene differs from those described previously. For chemical synthesis of haFGF 155 gene, codons were used which are the ones most often used by E. coli in highly expressed E. coli proteins. A plasmid with haFGF 155 (phaFGF 155) gene was obtained and was used to transform E. coli. Production of haFGF 154 protein was achieved by cultivation of the producer strain under conditions which slow down the lytic development of lambda phage. The haFGF 154 protein accumulated in culture medium in a soluble condition as a result of the producer strain cells lysis by the lambda phage. The haFGF 154 protein constituted 20% of the soluble protein accumulated in the culture medium and its biological activity was demonstrated by its ability to generate new vessels (angiogenesis). The initiator methionine residue at position 1 of the FGF 155 protein was completely removed during protein synthesis resulting in an FGF 154 amino acid product. The use of the phage-dependent method to produce other forms of the haFGF protein is also disclosed.
L'invention concerne le gène du facteur de croissance de fibroblastes acide humain (haFGF 155) obtenu par synthèse chimique. La séquence nucléotidique du gène haFGF 155 est déduite sur la base de la séquence d'acide aminé haFGF 155 tel que cela est décrit dans les documents connus. La séquence d'acide aminé de haFGF 155 synthétisé ne diffère pas de celles décrites dans les documents connus. La séquence nucléotidique du gène haFGF 155 diffère de celles décrites antérieurement. En ce qui concerne la synthèse du gène haFGF 155, on a recours à des codons qui sont le plus souvent utilisés par E. coli dans des protéines E. coli fortement exprimées. On obtient un plasmide avec un gène haFGF 155 (phaFGF 155) que l'on utilise pour transformer E. coli. On réalise la production de la protéine haFGF 154 en cultivant la souche productrice dans des conditions qui retardent le développement lytique du phage lambda. La protéine haFGF 154 s'accumule en milieu de culture à l'état soluble à la suite de la lyse des cellules de la souche productrice par le phage lambda. La protéine haFGF 154 constitue 20 % de la protéine soluble accumulée dans le milieu de culture et son activité biologique est démontrée par sa capacité de générer de nouveaux vaisseaux (angiogenèse). Le résidu de méthionine initiateur en position 1 de la protéine FGF 155 a été entièrement éliminé lors de la synthèse de protéines donnant lieu à un produit d'acide aminé FGF 154. L'invention concerne également l'utilisation du procédé dépendant du phage pour produire d'autres formes de la protéine haFGF.
Chernykh Svitlana I.
Kordyum Vitaliy A.
Slavchenko Iryna Yu.
Stegmann Thomas J.
Vozianov Oleksandr F.
Gowling Lafleur Henderson Llp
New Technologies Holding Pte. Ltd.
Phage Biotechnology Corporation
LandOfFree
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