A method of reducing non-specific amplification in pcr

Details A method of reducing non-specific amplification in pcr A method of reducing non-specific amplification in pcr

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C07H 19/00 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2464885

The invention provides methods for reducing non-specific amplification DNA in a polymerase chain reaction comprising providing a sample comprising a target DNA sequence of interest; contacting the sample with at least one enzyme having nucleic acid polymerase activity; and incubating the sample with said enzyme for a time and under conditions sufficient to amplify the target DNA sequence, forming amplified target sequence; wherein the incubation is performed in the presence of an amount of sorbitol, or sorbitol and DMSO effective to reduce the non-specific amplification relative to the amount of non-specific amplification observed in the absence of sorbitol, or sorbitol and DMSO. The methods are suitable for amplification of ribosomal DNA, particularly from clinical samples. Compositions and kits containing sorbitol, or sorbitol and DMSO for reducing non-specific amplification are also provided.

Procédés de réduction de l'ADN d'amplification non spécifique dans une réaction d'amplification par la polymérase, qui consiste à obtenir un échantillon contenant une séquence d'ADN cible à étudier, à mettre en contact ledit échantillon avec au moins une enzyme ayant une activité de polymérase d'acide nucléique et à faire incuber l'échantillon avec ladite enzyme pendant une durée et dans des conditions suffisantes pour amplifier la séquence d'ADN cible, ce qui permet d'obtenir une séquence cible amplifiée, l'incubation étant réalisée en présence d'une certaine quantité de sorbitol, ou de sorbitol et de DMSO efficace pour réduire l'amplification non spécifique par rapport à la quantité d'amplification non spécifique observée en l'absence de sorbitol, ou de sorbitol et de DMSO. Lesdits procédés sont appropriés pour l'amplification d'ADN ribosomique, en particulier à partir d'échantillons cliniques. Des compositions et des kits contenant du sorbitol, ou du sorbitol et du DMSO en vue de la réduction de l'amplification non spécifique sont également décrits.

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