C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/12 (2006.01) C07K 14/47 (2006.01) C07K 14/71 (2006.01) C07K 16/18 (2006.01) C07K 16/28 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01)
Patent
CA 2184988
A novel expression cloning method is provided for the detection, identification and purification of target proteins capable of binding at least to a tyrosine-phosphorylated domain of a eukaryotic tyrosine kinase using novel peptide probes comprising an amino acid sequence substantially corresponding to a portion of a tyrosine-phosphorylated domain of a tyrosine kinase. The probe has at least one phosphorylated tyrosine residue and may be detectably labeled. Also disclosed is a method for preparing the probe, a method for mapping to a chromosome a gene encoding a protein capable of binding to tyrosine-phosphorylated domains of tyrosine kinases, and a method for purifiying such a protein with the probe. Non-limiting examples of novel proteins discovered using the above cloning method include GRB-1, GRB-2, GRB-3, GRB-4 and GRB-7, as well as nucleic acid encoding these proteins, and methods for detecting these proteins are also provided.
Un nouveau procédé d'expression-clonage est utilisé dans la détection, l'identification et la purification de protéines cibles pouvant se lier au moins à un domaine phosphorylé par tyrosine d'une tyrosine-kinase eukaryote à l'aide de nouvelles sondes peptidiques comprenant une séquence d'acides aminés correspondant essentiellement à une partie du domaine phosphorylé par tyrosine d'une tyrosine-kinase. La sonde possède au moins un reste de tyrosine phosphorylé et peut être marquée de manière détectable. L'invention se rapporte également à un procédé de préparation de la sonde, à un procédé de cartographie, sur un chromosome, d'un gène codant une protéine pouvant se lier à des domaines phosphorylés par tyrosine des tyrosine-kinases, et à un procédé de purification de cette protéine à l'aide de la sonde. L'invention se rapporte encore à des exemples non limitatifs des nouvelles protéines découvertes à l'aide du procédé de clonage susmentionné et qui comprennent GRB-1, GRB-2, GRB-3, GRB-4 et GRB-7, ainsi qu'à l'acide nucléique codant ces protéines, et au procédé de détection de ces protéines.
Margolis Benjamin L.
Schlessinger Joseph
Skolnik Edward Y.
New York University
Osler Hoskin & Harcourt Llp
LandOfFree
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