C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/0735 (2010.01) C12N 5/077 (2010.01) A61K 35/12 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01)
Patent
CA 2657065
A novel population of multipotent cardiac precursor (MCP) cells derived from human blastocysts derived stem cells is disclosed, methods for the preparation thereof and use of the cells for in vitro testing. Basement cells derived from hBS cells are also disclosed and method for the preparation of MCP cells from basement cells. The MCP cells have the following characteristics i) at least 1 % of the cells exhibit no antigen expression of one or more markers for undifferentiated cell, the marker being selected from the group consisting of SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60, TRA-1-81 and Oct-4, ii) at least 1% of the cells exhibit no protein expression of one or more of a neural marker including nestin or GFAP iii) at least 1 % of the cells exhibit protein and/or gene expression of one or more of a mesodermal marker including brachyury, vimentin or desmin iv) at least 1% of the cells exhibit protein and/or gene expression of Flk-1 (KDR). Furthermore, the MCP cells have a characteristic morphology. They grow as clusters of small, round and phase-bright cells; individual cells are 5-20 µm in diameter and each cluster is composed of 2-500 cells. They form clusters of round or elongated shape, that appear as loosely adherent cell clumps that as illustrated in figure 2 panel a, b and c. Furthermore, they have a relatively high nucleus-to-cytoplasma ratio, e.g. 1 :2 - 1 :64 of the total volume of the cell and/or appear as balloons on a string, as illustrated in figure 18, schematic sketch. Moreover, the MCP cells are non-contracting.
L'invention concerne une nouvelle population de cellules précurseurs cardiaques multipotentes (MCP) dérivées de cellules souches dérivées de blastocystes humains, des procédés pour sa préparation et l'utilisation des cellules pour un essai in vitro. Des cellules de base dérivées de cellules de hBS sont également décrites, ainsi qu'un procédé pour la préparation des cellules MCP à partir des cellules de base. Les cellules MCP ont les caractéristiques suivantes : i) au moins 1 % des cellules ne présentent aucune expression antigénique d'un ou plusieurs marqueurs pour une cellule non différenciée, le marqueur étant choisi dans le groupe constitué de SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60, TRA-1-81 et Oct-4, ii) au moins 1 % des cellules ne présentent aucune expression protéinique d'un ou plusieurs marqueurs neuronaux comprenant la nestine ou GFAP, iii) au moins 1 % des cellules présentent une expression génétique et/ou protéinique d'un ou plusieurs marqueurs mésodermiques comprenant la protéine de Brachyury, la vimentine ou la desmine, iv), au moins 1 % des cellules présentent l'expression génétique et/ou protéinique de Flk-1 (KDR). En outre, les cellules MCP ont une morphologie caractéristique. Elles se développent sous forme de grappes de petites cellules rondes et de phase lumineuses ; les différentes cellules ont un diamètre de 5 à 20 µm, et chaque grappe est constituée de 2 à 500 cellules. Elles forment des grappes d'une forme ronde ou allongée, apparaissant sous forme de blocs de cellules faiblement adhérentes, comme illustré figure 2, planche a, b et c. En outre, elles ont un rapport noyau/cytoplasme relativement élevé, par exemple 1:2 à 1:64 du volume total de la cellule et/ou apparaissent comme des ballons avec une ficelle, comme illustré figure 18, représentation schématique. De plus, les cellules MCP ne se contractent pas.
Akesson Karolina
Ameen Caroline
Sartipy Peter
Cellartis Ab
Fetherstonhaugh & Co.
LandOfFree
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