C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 7/01 (2006.01) A61K 39/12 (2006.01) C07K 14/185 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/40 (2006.01) G01N 33/564 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01)
Patent
CA 2656560
Classical Swine Fever Virus (CSFV) E2 glycoprotein is a major inducer of neutralizing antibodies and protective immunity in swine. E2 mediates virus adsorption to the target cell, and harbors genetic determinants associated with virus virulence. CSFV E2 also contains between residues 829 and 837 a discrete epitope (TAVSPTTLR) recognized by monoclonal antibody (mAb) WH3O3, used to differentiate CSFV from related Pestiviruses Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) and Border Disease Virus (BDV). In this report, a CSFV infectious clone of the virulent Brescia isolate (BICv) was used to progressively mutate the mAb WH3O3 epitope of CSFV E2 to the homologous amino acid sequence of BVDV strain NADL E2 (TSFNMDTLA). While the resulting virus mutants TIv (TSFSPTTLR), T2v (TSFNPTTLR), T3v (TSFNMTTLR) demonstrated in vitro growth characteristics similar to those of parental BICv, mutants T4v (TSFNMDTLR) and T5v (TSFNMDTLA) exhibited a 10-fold decrease in virus yield and a significant decrease in plaque size relative to parental BICv. Immunohistochemical reactivity with WH303 was lost only in T3v, T4v and T5v.
La glycoprotéine E2 du virus de la fièvre porcine classique (VFPC) est un inducteur majeur des anticorps neutralisants et de l'immunité protectrice chez le porc. La protéine E2 médie l'adsorption du virus sur la cellule cible et elle contient les déterminants génétiques associés à la virulence du virus. La protéine E2 du VFPC contient également entre les résidus 829 et 837 un épitope discret (TAVSPTTLR) reconnu par l'anticorps monoclonal (Acm) WH303, utilisé pour différencier le VFPC des pestivirus apparentés que sont le virus de la diarrhée virale bovine (VDVB) et le virus de la maladie de la frontière (border disease, VBD). Dans ce rapport, un clone de VFPC infectieux issu de l'isolat virulent Brescia (BICv) a été utilisé afin de muter progressivement l'épitope de l'Acm WH303 de la protéine E2 du VFPC vers la séquence d'acides aminés homologue de la souche NADL E2 du VDVB (TSFNMDTLA). Tandis que les mutants de virus T1v (TSFSPTTLR), T2v (TSFNPTTLR) et T3v (TSFNMTTLR) obtenus ont présenté in vitro des caractéristiques de croissance similaires à celle du BICv parent, les mutants T4v (TSFNMDTLR) et T5v (TSFNMDTLA) ont présenté un décuplement du rendement en virus et une diminution significative de la taille des plaques par rapport au BICv parent. La réactivité immunohistochimique vis-à-vis du WH303 a été perdue uniquement dans le T3v, le T4v et le T5v. Chose intéressante, la mutation progressive de l'épitope WH303 a eu un effet additif sur l'atténuation du virus chez le porc, les mutants T1v, T2v ou T3v induisant progressivement une FPC plus modérée mais invariablement mortelle, le T4v induisant seulement une maladie clinique bénigne et transitoire et le T5v n'induisant pas de maladie. Les porcs infectés par le T4v ou par le T5v ont présenté une diminution de la réplication virale dans les amygdales, les ganglions lymphatiques drainants, la rate et les reins et une réduction significative du relargage viral. Enfin, les animaux infectés par le T5v étaient protégés contre la maladie clinique lorsqu'ils ont été soumis à une épreuve avec le virus Brescia virulent à J3 ou J21 post-inoculation du T5v. Ces résultats indiquent que les résidus acides aminés 830 à 834 de la protéine E2 sont critiques pour la virulence du VFPC chez le porc et que la manipulation de ce locus peut servir de base à un vaccin anti-FPC vivant atténué conçu de façon rationnelle.
Borca Manuel V.
Risatti Guillermo R.
Borden Ladner Gervais Llp
The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agricul Ture
LandOfFree
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