C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/00 (2006.01) A01K 67/027 (2006.01) C07K 1/00 (2006.01) C07K 14/00 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01) C07K 17/00 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01)
Patent
CA 2540667
The invention relates to a method of producing a protein of interest, comprising making a non-human transgenic mammal that produces said protein in its milk, obtaining said milk from the non-human transgenic mammal and purifying said protein of interest from the milk. Transgenic bovine animals were generated, which are able to produce human growth hormone in mammary glands. The method involves cloning of a genetic construct encoding hGH gene and beta casein promoter conveniently in an expression vector. It also includes transfection procedures into fetal bovine somatic cells, generally fibroblasts, and the nuclear transfer into enucleated bovine oocytes, generating thus transgenic embryos. The method also includes other procedures to generate transgenic embryos for the further expansion of the transgenic herd, such as the subcloning of transgenic female bovines, the superovulation of transgenic cows and their insemination with semen from a non-transgenic or a transgenic male bovine, and the superovulation of non-transgenic cows and their insemination with semen from a transgenic male bovine Afterwards, transgenic embryos give rise to transgenic cattle that produce human growth hormone in huge amounts in their milk, from which the hormone is completely purified and analysed to fulfill all the requirements for the manufacture of a pure biopharmaceutical product.
La présente invention concerne un procédé de production d'une protéine recherchée, avec fabrication d'un mammifère transgénique non-humain qui produit ladite protéine dans son lait, obtention dudit lait à partir du mammifère transgénique non-humain, et purification de ladite protéine recherchée provenant du lait. On utilise des bovins transgéniques qui ont été engendrés pour être capables de produire dans leurs glandes mammaires l'hormone de croissance humaine. A cet effet, on clone une construction génétique codant le gène hGH et le promoteur de la bêta caséine dans un vecteur d'expression. On utilise des procédures de transfection portant sur des cellules somatiques foetales de bovins, généralement les fibroblastes, et on réalise un transfert du nucleus dans des ovocytes bovins énucléés, générant ainsi des embryons transgéniques. Le procédé comporte également d'autres procédures visant à générer des embryons transgéniques en vue du développement futur du cheptel transgénique, et notamment un sous-clonage de femelles bovines transgéniques, une superovulation de vaches transgénique et leur insémination avec la semence d'un bovin mâle, transgénique ou non-transgénique, et une superovulation de vaches non-transgénique et leur insémination avec la semence d'un bovin mâle transgénique. Par la suite, les embryons transgéniques donnent naissance à un bétail transgénique produisant l'hormone de croissance humaine en grande quantité dans leur lait, à partir duquel l'hormone est complètement purifiée et analysée pour respecter toutes les normes de fabrication d'un produit biopharmaceutique pur.
Baranao Lino
Carbonnetto Cesar
Melo Carlos Alberto
Mbm Intellectual Property Law Llp
Sterrenbeld Biotechnologie North America Inc.
LandOfFree
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