C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/00 (2006.01) A01K 67/027 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01)
Patent
CA 2540854
The invention relates to a method of producing a protein of interest, comprising making a non-human transgenic mammal that produces said protein in its milk, obtaining said mild from the non-human transgenic mammal and purifying said protein of interest from the milk. Transgenic bovine animals were generated, which are able to produce human growth hormone in mammary glands. The method involves cloning of a genetic construct encoding hGH gene and beta casein promoter conveniently in an expression vector. It also includes transfection procedures into fetal bovine somatic cells, generally fibroblasts, and the nuclear transfer into enucleated bovine oocytes, generating thus transgenic embryos. The method also includes other procedures to generate transgenic embryos for the further expansion of the transgenic herd, such as the subcloning of transgenic female bovines, the superovulation of transgenic cows and their insemination with semen from a non-transgenic or a transgenic male bovine, and the superovulation of non-transgenic cows and their insemination with semen from a transgenic male bovine. Afterwards, transgenic embryos give rise to transgenic cattle that produce human growth hormone in huge amounts in their milk, from which the hormone is completely purified and analysed to fulfill all the requirements for the manufacture of a pure biopharmaceutical product.
La présente invention concerne un procédé permettant de produire une protéine présentant un intérêt, lequel procédé consiste à créer un mammifère transgénique non humain produit une telle protéine dans son lait ; à obtenir le lait du mammifère transgénique non humain et à retirer ladite protéine du lait. Le procédé décrit dans cette invention a permis de créer des bovins transgéniques capables de produire une hormone de croissance humaine dans les glandes mammaires. Le procédé susmentionné consiste à cloner une construction génétique codant pour le gène hGH et le promoteur de bêta caséine, de manière appropriée dans un vecteur d'expression. Le procédé comprend également des procédures de transfection dans des cellules somatiques foetales bovines, généralement des fibroblastes, ainsi que le transfert de noyau dans des ovocytes bovins sans noyau, ce qui permet de générer des embryons transgéniques. Le procédé décrit dans cette invention comprend également des procédures consistant à générer des embryons transgéniques pour la création ultérieure du troupeau transgénique, telles que le sous-clonage de bovins femelles transgéniques, la superovulation de vaches transgéniques et leurs insémination au moyen d'une semence provenant d'un bovin mâle non transgénique ou d'un bovin mâle transgénique, et la superovulation de vaches non transgéniques et leurs insémination au moyen d'une semence provenant d'un bovin mâle transgénique. Ensuite, les embryons transgéniques donnent naissance à un boeuf transgénique produisant une hormone de croissance humaine en très grande quantité dans le lait, d'où l'hormone est complètement extraite puis analysée pour répondre aux exigences de fabrication d'un produit biopharmaceutique pur.
Baranao Lino
Melo Carlos Alberto
Mbm Intellectual Property Law Llp
Sterrenbeld Biotechnologie North America Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1908228