A rapid and sensitive assay for the detection and...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01)

Patent

CA 2473708

Biosensors and methods to determine the activity of any and all nucleic acid binding factors, proteins, cellular events, nucleic acid binding protein coregulators, or fragments thereof, based upon the stabilization of the interaction of two nucleic acid components, which together comprise a complete nucleic acid binding element, by the binding of a nucleic acid binding factor are provided. Preferably, a fluorescence donor is attached to a nucleic acid comprising one portion or component of a complete nucleic acid binding element and a fluorescence acceptor is attached to a nucleic acid comprising the other portion or component of the same complete binding element. Alternatively, a solid substrate is attached to a nucleic acid comprising one portion of a binding element and a detectable label is attached to a nucleic acid comprising the other portion of the same binding element. Binding of a nucleic acid binding factor to the nucleic acid components affects a change in luminescence or the association of the detectable label with the solid substrate. These biosensors and methods may also be used to detect mediating nucleic acid binding factor coregulators, post-translational modifications and cellular events, to diagnose diseases and/or screen for drugs or other ligands that mediate the activity of nucleic acid binding factors.

Cette invention a trait à des biocapteurs et à des techniques permettant de déterminer l'activité d'un quelconque facteur de fixation à l'acide nucléiques ainsi que de tous ces facteurs, de protéines, d'événements cellulaires et de co-régulateurs de protéine de fixation aux acides nucléiques ou de leurs fragments et ce, en fonction de la stabilisation de l'interaction existant entre deux composants d'acide nucléique, comportant ensemble un élément complet de fixation aux acides nucléiques, par la fixation d'un facteur de fixation aux acides nucléiques. On rattache, de préférence, un donneur de fluorescence à un acide nucléique comprenant une partie ou un composant d'un élément complet de fixation aux acides nucléiques tandis qu'un accepteur de fluorescence est rattaché à un acide nucléique comprenant l'autre partie ou le composant du même élément complet de fixation. Dans une variante, on rattache un substrat solide à un acide nucléique comprenant une partie d'un élément de fixation tandis qu'un marqueur pouvant être détecté est rattaché à un acide nucléique comprenant l'autre partie du même élément de fixation. La fixation d'un facteur de fixation aux acides nucléiques aux composants d'acide nucléiques modifie la luminescence ou l'association du marqueur et du substrat solide. On peut également utiliser ces biocapteurs et les techniques afférentes pour détecter la médiation de co-régulateurs de facteurs de fixation aux acides nucléiques, des modifications suivant une traduction génétique et des événements cellulaires. On peut également les utiliser pour diagnostiquer des états pathologiques et/ou procéder à des criblages de médicaments ou d'autres ligands liés à l'activité de facteurs de fixation aux acides nucléiques.

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