A rapid homogeneous immunoassay using electrophoresis

Details A rapid homogeneous immunoassay using electrophoresis A rapid homogeneous immunoassay using electrophoresis

G - Physics

01

N

G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/558 (2006.01) G01N 33/561 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01) G01N 33/577 (2006.01)

Patent

CA 2714024

The present invention concerns methods, compositions and apparatus for detection and/or determination of concentration of target molecules. In preferred embodiments the methods comprise allowing target molecules to form a complex with a first binding agent conjugated to a detection molecule and a second binding agent conjugated to a capture molecule, allowing the complex to further bind to an essentially uncharged polymer capable of binding to the capture agent, and performing a vertical gradient electrophoresis to separate the complex from unbound target, first and second binding agents and polymer. The intact complex is concentrated by electrophoresis at a stacking layer and the detection molecule is detected and/or quantified. Because the complex contains a very high mass to charge ratio, it becomes essentially immobile at the stacking layer, while unbound components migrate through the stacking layer and are separated from the complex. This provides a very rapid and sensitive assay that can detect very low concentrations of target molecules in short time.

L'invention concerne des procédés, des compositions et un appareil de détection et/ou détermination d'une concentration de molécules cibles. Dans des modes de réalisation préférés, les procédés consistent à permettre à des molécules cibles de former un complexe avec un premier agent de liaison conjugué à une molécule de détection et un second agent de liaison conjugué à une molécule de capture, permettre au complexe de se lier ensuite à un polymère essentiellement non chargé qui peut se lier à l'agent de capture, et effectuer une électrophorèse à gradient vertical pour séparer le complexe de la cible non liée, des premier et second agents de liaison et du polymère. Le complexe intact est concentré par électrophorèse au niveau d'une couche d'empilage et la molécule de détection est détectée et/ou quantifiée. Comme le complexe contient un rapport masse sur charge très élevé, il devient essentiellement immobile au niveau de la couche d'empilage, alors que les composants non liés migrent à travers la couche d'empilage et sont séparés du complexe. Cela permet un dosage très rapide et très sensible qui peut détecter des concentrations très faibles de molécules cibles en peu de temps.

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