C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/11 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01)
Patent
CA 2342393
A method for synthesizing a DNA whereby the time required in the DNA synthesis by the polymerase chain reaction (PCR) method can be shortened, characterized in that PCR is effected under the conditions (A) and (B) as will be defined below with the use of DNA polymerase in an amount effective in giving more than 10 ng of amplified DNA fragments of about 2 kb per 50 µl of a liquid reaction mixture: (A) using 50 µl of a liquid reaction mixture containing DNA polymerase, 1 ng of Escherichia coli genomic DNA and 10 pmol portions of primers Eco-1 and Eco-2 having the base sequences represented respectively by SEQ ID NOS: 1 and 2 in Sequence Listing, and having a composition adequate for the DNA polymerase; and (B) effecting the PCR for 35 cycles with each cycle consisting of 1 second at 99 ~C and 7 seconds at 66 ~C; a DNA synthesis kit to be used in this DNA synthesis method; and a PCR reagent product. The above method makes it possible to quicken operations in genetic engineering studies and the genetic engineering industry.
La présente invention concerne un procédé de synthèse de l'ADN. Selon ce procédé, il est possible d'accélérer la synthèse de l'ADN par amplification en chaîne par polymérase (ACP), ce procédé se caractérisant en ce que cette réaction s'effectue dans les conditions (A) et (B) définies ci-après et que la polymérase est utilisée en doses efficaces donnant plus de 10 ng de fragments amplifiés d'ADN d'un mélange d'environ 2 kb per 50 mu l d'un mélange réactif liquide. Ces conditions sont: (A) emploi de 50 mu l d'un mélange réactif liquide renfermant de la polymérase d'ADN, 1 ng d'ADN génomique de Escherichia coli et 10 parties pmol d'amorces Eco-1 et Eco-2 possédant des séquences de base représentées respectivement par SEQ ID N DEG 1 et N DEG 2 dans l'ordre des séquences, et dont la composition est appropriée pour la polymérase d'ADN; et (B) exécution de la réaction ACP à raison de 35 cycles, chaque cycle durant 1 seconde à 99 DEG C et 7 secondes à 66 DEG C: Pour ce procédé de synthèse, il faut utiliser un kit de synthèse de l'ADN et un réactif pour réaction ACP. Le procédé décrit ci-dessus permet d'accélérer les opérations pour les études de génie génétique et pour l'industrie du génie génétique.
Asada Kiyozo
Fujita Tomoko
Hagiya Michio
Kato Ikunoshin
Miyake Kazue
Kirby Eades Gale Baker
Takara Bio Inc.
Takara Shuzo Co. Ltd.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1599819