C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/12 (2006.01) C07K 14/705 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01)
Patent
CA 2163432
A modified gene coding for the human D4 dopamine receptor has been synthesized by chemo-enzymatic methods. The nucleotide sequence of the D4 dopamine receptor gene was changed to reduce the G+C content and to eliminate intronic sequences, while maintaining the published amino acid sequence. Using gene splicing by overlap extension and PCR amplification of long oligonucleotides (> 200 bases), 3 synthetic fragments of about 400 base pairs each were amplified, from which the full length gene was assembled. Stable expression of this gene has been achieved in CHO-K1 cells, using an inducible expression system, and in HEK293 cells.
Gène modifié codant pour le récepteur de la dopamine D4 humaine synthétisé par un procédé enzymatique. La séquence nucléotidique du gène du récepteur de la dopamine D4 a été modifiée de manière à réduire son contenu de G + C et à éliminer les séquences introniques, tout en conservant la séquence d'aminoacides publiée. En recourant à l'épissurage des gènes par recouvrement et à l'amplification PCR des oligonucléotides longs (> 200 bases), 3 fragments de synthèse d'env. 400 paires de base chacun ont été amplifiés, à partir desquels le gène de longueur entière a été assemblé. On a obtenu une expression stable dans des cellules CHO-K1 à l'aide d'un système d'expression inductible et dans les cellules HEK293.
Chio Christopher L.
Huff Rita M.
Macrae & Co.
Pharmacia & Upjohn Company
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1454022