Activity-based probes, and methods of their preparation and use

C - Chemistry – Metallurgy – 07 – F

Patent

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C07F 5/02 (2006.01) C07C 1/00 (2006.01) C07C 237/10 (2006.01) C07C 257/10 (2006.01) C07C 323/24 (2006.01) C07D 207/16 (2006.01) C07D 209/44 (2006.01) C07D 311/86 (2006.01) C07D 495/04 (2006.01) C12Q 1/37 (2006.01)

Patent

CA 2501831

The present invention provides compositions and methods for assessing profiles of catalytically active enzymes in compositions containing a plurality of proteins. In preferred embodiments, the enzyme is a hydrolase, most preferably a cysteine protease. The methods described herein use activity based probes ("ABPs") that have an affinity moiety for directing the binding of the ABP to one or more catalytically active target enzymes, a reactive group for forming a covalent bond at an active site of the target enzyme(s), and a TAG (e.g., a detectable label, preferably a fluorophore). One or more ABPs may be combined with a protein-containing sample under conditions for binding and reaction of the ABP(s) with target enzyme(s) that are present in the sample. The resulting products may then be used to assess the active enzyme profile of the sample, and can be correlated to the presence, amount, or activity of one or more target enzyme(s) present in the original complex protein mixture.

L'invention concerne des compositions et des procédés d'évaluation de profils d'enzymes à activité catalytique, dans des compositions contenant plusieurs protéines. Dans des modes de réalisation préférés, l'enzyme est une hydrolase, idéalement une cystéine protéase. Dans les procédés de l'invention, on utilise des sondes basées sur l'activité (ABPS) possédant un fragment d'affinité pour diriger la liaison de l'ABP à une ou plusieurs enzymes cibles à activité catalytique, un groupe réactif pour former une liaison covalente sur un site actif de la ou des enzymes cibles, et une ETIQUETTE (ex. un marqueur détectable, de préférence un fluorophore). Une ou plusieurs ABPs peuvent être combinées à un échantillon contenant des protéines, dans des conditions de liaison et de réaction des ABPS avec une ou plusieurs enzymes cibles présentes dans l'échantillon. On peut ensuite utiliser les produits résultants pour évaluer le profil d'enzymes actives de l'échantillon, et on peut les corréler avec la présence, la quantité ou l'activité d'une ou plusieurs enzymes cibles présentes dans le mélange de protéines complexe original.

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