C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/00 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/64 (2006.01) C12N 15/861 (2006.01) C12N 15/864 (2006.01)
Patent
CA 2283253
A new series of helper cell lines for the complementation, amplification, and controlled attenuation of E1-deleted adenovirus are disclosed in the present invention. These cell lines are advantageous because they can complement adenovirus E1 genedeletions without production of replication competent adenovirus (RCA), thus making them safer for the large-scale production of adenovirus stock for use in human genetherapy trials. A preferred embodiment is an A549E1 cell line that contains only the Ad5 E1 DNA sequences sufficient for complementation of E1-deleted adenoviral vectors without sequences that overlap with the adenovirus vector. In another aspect, the present invention embodies methods for the production of second generation A549-E1 complementing cell lines that, in addition to producing E1, also produce proteins required for further manipulation of adenoviral vectors. A preferred embodiment is an A549E1 cell line with DNA sequences that encode a polypeptide sufficient for packaging attenuation of E1-deleted helper virus, in order to enrich for packaging of mini-adenovirus.
Cette invention se rapporte à une nouvelle série de lignées cellulaires auxiliaires destinées à la complémentation, à l'amplification et à l'atténuation régulée d'adénovirus à délétion en E1. Ces lignées cellulaires présentent l'avantage de pouvoir compléter les délétions de gène dans la région E1 d'un adénovirus sans produire d'adénovirus apte à la réplication (RCA replication-competent adenovirus), ce qui les rend plus sures pour une production en masse de population d'adénovirus destinés à des essais en thérapie génique humaine. Une lignée cellulaire A549E1, qui est une réalisation préférée de cette invention, ne contient que les séquences d'ADN de la région E1 de l'adénovirus 5, suffisantes pour la complémentation de vecteurs adénoviraux à délétion en E1 sans séquence de recouvrement avec le vecteur d'adénovirus. Cette invention se rapporte en outre à des procédés de production de lignées cellulaires de complémentation A549-E1 de seconde génération qui, non seulement produisent E1, mais également des protéines nécessaires à une manipulation ultérieure des vecteurs adénoviraux. Une réalisation préférée est une lignée cellulaire A549E1 possédant des séquences d'ADN qui codent un polypeptide capable de conditionner l'atténuation du virus auxiliaire à délétion en E1, dans le but de valoriser le conditionnement de mini-adénovirus.
Alemany Ramon
Ayares David
Zhang Wei-Wei
Baxter International Inc.
Mbm & Co.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1435110