Adenovirus vectors for the transfer of genes in targeted cells

Details Adenovirus vectors for the transfer of genes in targeted cells Adenovirus vectors for the transfer of genes in targeted cells

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/86 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C12N 5/16 (2006.01) C12N 15/861 (2006.01)

Patent

CA 2394099

The invention relates to a Canine Adenovirus (CAV) vector obtainable by a process comprising the following steps: a) co-transforming E. coli cells having recBC sbcBC phenotype by a first plasmid and a pre-transfer plasmid in conditions enabling their recombination by homologous recombination, in order to generate a transfer plasmid devoid from a functional E1 coding region, comprising the desired recombinant vector genome, wherein the first plasmid comprises the Inverted Terminal Regions (ITR) and the Packaging Signal (.psi.) sequences of a CAV genome, and the pre-transfer plasmid includes the sequence whose insertion in the vector genome is desired, flanked by sequences homologous to sequences of the first plasmid surrounding the region of the first plasmid where the modification is desired; b) isolating a DNA fragment essentially comprising the recombinant vector genome by enzyme restriction; c) transfecting DK28Cre cells (CNCM I-2293) that are rendered able to transcomplement this recombinant vector genome; d) recovering and purifying the recombinant adenoviral particles produced. The obtained vector may be used for the transfer of any gene of interest in target cells, especially in neuronal cells.

L'invention concerne un vecteur d'adénovirus canin (CAV) obtenu à l'aide d'un procédé consistant (a) à co-transformer des cellules d'E. <u>coli</u> présentant un phénotype recBC sbcBC au moyen d'un premier plasmide et d'un plasmide de pré-transfert dans des conditions permettant leur recombinaison par recombinaison homologue, d'où la production d'un plasmide de transfert dépourvu de région de codage E1 fonctionnelle, et comprenant le génome de vecteur recombinant souhaité, le premier plasmide renfermant les régions terminales inversées (ITR) et les séquences de signal d'encapsidation (.psi.) d'un génome CAV, le plasmide de transfert comprenant la séquence que l'on souhaite insérer dans le génome de vecteur, des séquences homologues aux séquences du premier plasmide entourant la région du premier plasmide où la modification est souhaitée, (b) à isoler un fragment d'ADN comprenant essentiellement le génome de vecteur recombinant par restriction enzymatique, (c) à transfecter des cellules DK28Cre (CNCM I-2293) habilitées à transcomplémenter ce génome de vecteur recombinant, et (d) à récupérer et purifier les particules adénovirales recombinantes résultantes. Le vecteur ainsi obtenu peut être utilisé pour le transfert de n'importe quel gène d'intérêt dans des cellules cibles, et notamment dans des cellules neuronales.

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