Agonist versus antagonist binding to g protein-coupled...

G - Physics – 01 – N

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G01N 33/52 (2006.01) C07K 1/00 (2006.01) C07K 14/00 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01)

Patent

CA 2413081

A method of characterizing the biophysical properties of G protein-coupled receptors in response to binding by ligands. The clone human .delta.opioid receptor immobilized in a solid-supported lipid bilayer was investigated by a method featuring coupled plasmon-waveguide resonance (CPWR) spectroscopy. The invention offers a highly sensitive method that directly monitors mass density, conformation, and molecular orientation changes occurring in anisotropic thin films, and allows direct determination of binding constants. Although both agonist and antagonist binding to the receptor cause increases in molecular ordering within the proteolipid membrane, only agonist binding induces an increase in thickness and molecular packing density of the membrane (10). This provides a method of discriminating between agonist and antagonist binding.

Procédé servant à caractériser les propriétés biophysiques de récepteurs couplés à la protéine G en réponse à leur fixation par des ligands. On a effectué des investigations sur le récepteur de .delta.-opioïdes cloné humain immobilisé dans une bicouche lipidique supportée par un solide au moyen d'un procédé mettant en application la spectroscopie par résonance de guides d'ondes au plasmon couplés (CPWR). L'invention présente un procédé extrêmement sensible permettant de contrôler directement les modifications de densité de masse, de conformation et d'orientation moléculaire apparaissant dans des couches minces anisotropes et de déterminer directement des constantes de fixation. Bien que la fixation à la fois de l'agoniste et de l'antagoniste au récepteur provoque des augmentations de l'ordonnancement moléculaire à l'intérieur de la membrane protéolipidique, seule la fixation de l'agoniste induit une augmentation de l'épaisseur et de la densité du regroupement moléculaire de la membrane (10). Ceci constitue un procédé servant à effectuer une distinction entre la fixation de l'agoniste et celle de l'antagoniste.

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