C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/80 (2006.01) C12N 1/15 (2006.01)
Patent
CA 2286307
The invention relates to Agrobacterium mediated transformation of moulds comprising species of the fungal sub-divisions Ascomycotina, Basidiomycotina, Deuteromycotina, Mastigomycotina, and Zygomycotina. Examples demonstrate the transformation of Aspergillus awamori (both protoplasts and conidia), Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Colletovtrichum gloeosporioides, Fusarium solani pisi, Neurospora Crassa, Trichoderma reesei, Pleurotus ostreatus and Agaricus bisporus (all conidia), and Fusarium graminearum (both conidia and rehydrated freeze dried ATCC material). Especially for Aspergillus awamori the transformation frequency is much higher than with conventional mould transformation techniques. It has further been found that not only one expressable gene can be introduced into these moulds, but even multiple copies of such gene, which, moreover, can be targeted e.g. in the chromosomal pyrG locus, as exemplified for A. awamori. These multiple copies can be of a gene encoding a desired, homologous or heterologous, protein.
L'invention concerne la transformation favorisée par Agrobacterium de moisissures comprenant des espèces des sous-divisions fongiques Ascomycotina, Basidiomycotina, Deuteromycotina, Mastigomycotini et Zygomycotina. Des exemples démontrent la transformation d'Aspergillus awamori (à la fois protoplastes et conidies), Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium solani pisi, Neurospora crassa, Trichoderma reesei, Pleurotus ostreatus et Agaricus bisporus (toutes conidies) et Fusarium graminearum (à la fois conidies et matériau ATCC lyophilisé réhydraté). Particulièrement en ce qui concerne Aspergillus awamori, la fréquence de transformation est beaucoup plus importante qu'avec des techniques classiques de transformation de moisissures. On a découvert, de plus, qu'on peut introduire non seulement un gène pouvant être exprimé dans ces moisissures, mais même des copies multiples de ces gènes, qu'on peut, de plus, cibler, par exemple, dans le locus chromosomique de pyrG, comme le démontre l'exemple d'A. awamori. Ces copies multiples peuvent être celles d'un gène codant une protéine souhaitée, homologue ou hétérologue.
Beijersbergen Alida Godelieve Maria
Bundock Paul
de Groot Marcellus Johannes Augustinus
Gouka Robertus Johannes
Hooykaas Paul Jan Jacob
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Plc Unilever
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2045934