Alphavirus particles and methods for preparation

Details Alphavirus particles and methods for preparation Alphavirus particles and methods for preparation

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 7/02 (2006.01) C12N 7/04 (2006.01) C12N 15/86 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01)

Patent

CA 2509979

Provided herein are methods for producing alphavirus replicon particles in high yield; replicon RNAs are electroporated into permissive cells, where the cells are at a relatively high density, together with at least one helper nucleic acid providing the necessary functions for packaging. After a growth period in appropriate medium, alphavirus replicon particles are harvested from the surfaces of the cells in which they were produced using a salt wash in which the salt concentration is from about 0.2 to about 5 M sodium chloride, calcium chloride, magnesium chloride, potassium chloride, ammonium acetate, ammonium bicarbonate, among others. After dilution, if necessary, the particles can be purified by a suitable chromatographic technique.

L'invention concerne des procédés de fabrication de particules de réplicons d'alphavirus avec un rendement élevé: les ARN des réplicons sont déposés par électro-déposition dans des cellules permissives, lesdites cellules ayant une densité relativement élevée, avec au moins un acide nucléique assistant qui remplit les fonctions d'encapsidation. Après une période de croissance dans un milieu approprié, les particules de réplicons sont collectées des surfaces des cellules dans lesquelles elles ont été traitées au moyen d'un primaire à base de sel, la concentration de sel étant comprise entre environ 0,2 et environ 5 M de chlorure de sodium, de chlorure de calcium, de chlorure de magnésium, de chlorure de potassium, d'acétate d'ammonium, de bicarbonate d'ammonium, etc. Après dilution, les particules peuvent être purifiées si nécessaire au moyen d'une technique de chromatographie appropriée.

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