Alphavirus rna replicon systems

Details Alphavirus rna replicon systems Alphavirus rna replicon systems

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 7/01 (2006.01) A61K 39/00 (2006.01) A61K 39/12 (2006.01) C07K 14/18 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 7/04 (2006.01) C12N 15/86 (2006.01)

Patent

CA 2220964

The present invention provides a helper cell for expressing an infectious, replication defective, alphavirus particle in an alphavirus-permissive cell. The helper cell includes (a) a first helper RNA encoding (i) at least one alphavirus structural protein, and (ii) not encoding at least one alphavirus structural protein; and (b) a second helper RNA separate from the first helper RNA, the second helper RNA (i) not encoding the alphavirus structural protein encoded by the first helper RNA, and (ii) encoding the at least one alphavirus structural protein not encoded by the first helper RNA. Preferably, the helper cell is co-transfected with a replicon RNA encoding an alphavirus packaging segment and an inserted heterogeneous RNA, such that all of the alphavirus structural proteins assemble together into alphavirus particles in the cell, with said replicon RNA packaged therein.

L'invention concerne une cellule auxiliaire pour l'expression d'une particule d'alphavirus infectieuse et déficitaire en réplication dans une cellule permissive vis à vis des alphavirus. Ladite cellule auxiliaire comporte (a) un premier ARN auxiliaire codant (i) au moins une protéine structurale d'alphavirus, et (ii) ne codant pas au moins une protéine protéine structurale d'alphavirus; et (b) un second ARN auxiliaire séparé du premier ARN auxiliaire, (i) ne codant pas la protéine structurale d'alphavirus codée par le premier ARN auxiliaire, et (ii) codant la ou les protéines structurales d'alphavirus non codées par le premier ARN auxiliaire. De préférence, la cellule auxiliaire est cotransfectée à l'aide d'un ARN réplicon codant un segment d'encapsidation d'alphavirus et un ARN hétérogène inséré, de sorte que toutes les protéines structurales d'alphavirus s'assemblent entre elles et forment des particules d'alphavirus dans la cellule, ledit ARN réplicon étant encapsidé à l'intérieur de celle-ci.

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