C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
Patent
CA 2607532
The present invention relates, e.g., to a method for amplifying a small number of copies (e.g. a single copy) of a single-stranded circular DNA molecule (e.g. having a size of about 5-6 kb) by an isothermal rolling circle mechanism, using random or partially random primers and a F29-type DNA polymerase. The method, which can also be used for amplifying DNAs by non- rolling types of multiple displacement amplification, comprises incubating the reaction components in a small volume, e.g. about 10~l or less, such as about 0.6~l or less. The degree of amplification can be about 109 fold, or higher. A method for cell-free cloning of DNA, using the rolling circle amplification method of the invention, is described.
La présente invention porte sur une méthode d'amplification d'un petit nombre de copies (par exemple, une copie unique) d'une molécule d'ADN circulaire monocaténaire (ayant une taille d'environ 5 à 6 kb) par un mécanisme isothermique à cercle roulant, cette méthode utilisant des amorces aléatoires ou partiellement aléatoires et une polymérase d'ADN de type .PHI.29. Cette méthode, qui peut être également utilisée pour amplifier des ADN par des types non roulants d'amplification à déplacements multiples, consiste à incuber les composants de la réaction dans un petit volume, par exemple, environ 10?l ou moins, tel qu'environ 0,6?l ou moins. Le degré d'amplification peut atteindre environ 109 ou plus. L'invention porte également sur une méthode de clonage de l'ADN exempte de cellules utilisant l'amplification en cercle roulant précitée.
Hutchison Clyde A. III
Smith Hamilton O.
J. Craig Venter Institute
Mbm Intellectual Property Law Llp
Synthetic Genomics Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1644861