Amplification and separation of nucleic acid sequences using...

G - Physics – 01 – N

Patent

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G01N 15/06 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2369016

Described and disclosed are devices, methods, and compositions of matter for the multiplex amplification and analysis of nucleic acid sequences in a sample using novel strand displacement amplification technologies in combination with bioelectronic microchip technology. Specifically, a nucleic acid in a sample is amplified to form amplicons, the amplicons are addressed to specified electronically addressable capture sites of the bioelelectronic microchip, the addressed amplicons are captured and labeled, and then the capture sites are analyzed for the presence of label. Samples may be amplified using strand displacement amplification. The invention is also amenable to other amplification methodologies well known by those skilled in the art. The capture and label steps may be by a method of universal capture with sequence specific reporter, or by a method of sequence specific capture with universal reporter. The label may be detected by fluorescence, chemiluminescence, electrochemiluminescence, or any other technique as are well known by those skilled in the art. This invention further allows for analyzing multiple nucleic acid targets on a single diagnostic platform wherein the nucleic acids may be amplified while either in direct contact with microchip components or in solution above the microchip array.

On décrit des dispositifs, des procédés et des compositions de matière utiles pour effectuer l'amplification multiplex et l'analyse de séquences d'acide nucléique d'un échantillon au moyen de nouvelles technologies d'amplification par déplacement de brin combinées à une technologie de micropuce bioélectronique. De manière plus spécifique, un acide nucléique présent dans un échantillon est amplifié pour former des amplicons, ces amplicons étant destinés à des sites spécifiés de capture adressables électroniquement de la micropuce bioélectronique ; les amplicons adressés sont capturés et marqués, puis les sites de capture sont analysés pour rechercher la présence du marqueur. Des échantillons peuvent être amplifiés par amplification par déplacement de brin. Cette invention peut également conduire à d'autres méthodologies d'amplification bien connues par les personnes de l'art. Les étapes de capture et de marquage peuvent être réalisées au moyen d'un procédé de capture universelle avec un reporteur à spécificité de séquence, ou à l'aide d'un procédé de capture spécifique à une séquence avec un reporteur universel. Le marqueur peut être détecté par fluorescence, chimiluminescence, électrochimiluminescence ou tout autre technique bien connue des personnes de l'art. Cette invention permet également d'analyser plusieurs cibles d'acide nucléique sur une seule plate-forme de diagnostic où les acides nucléiques peuvent être amplifiés soit alors qu'ils sont en contact direct avec les constituants de la micropuce soit alors qu'ils sont en solution au-dessus du réseau de la micropuce.

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