Amplification and sequencing primer pairs and use thereof

Details Amplification and sequencing primer pairs and use thereof Amplification and sequencing primer pairs and use thereof

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2365980

Amplification primer pairs comprising an oligonucleotide anchor and primer. The anchor has a nucleic acid chemistry which is not a substrate for reverse transcriptases and DNA polymerases, and a 3'-end which is not capable of priming DNA synthesis. The primer has a nucleic acid chemistry that is a substrate for reverse transcriptases and DNA polymerases. The anchor and the primer each include regions of nucleotide complementarity which are capable of associating with each other to form a stem structure. The stem structure includes a nucleotide sequence which is complementary to an universal primer. One primer pair (reverse pair) is used for first strand synthesis, while the second primer pair (forward pair) is used for second strand synthesis. The universal primers sustain the amplification reaction and produce the majority of the final product.

Paires d'amorces d'amplification contenant une ancre et une amorce oligonucléotidique. L'ancre présente une chimie d'acide nucléique ne constituant pas un substrat pour des transcriptases inverses et des ADN polymérases, et une extrémité 3' incapable d'amorcer la synthèse de l'ADN. L'amorce présente une chimie d'acide nucléique constituant un substrat pour des transcriptases inverses et des ADN polymérases. L'ancre et l'amorce contiennent chacune des régions de nucléotides complémentaires, lesquelles sont capables de s'associer mutuellement pour former une structure de souche. La structure de souche contient une séquence nucléotidique complémentaire d'une amorce universelle. Une paire d'amorces (paire inverse) est utilisée pour la synthèse du premier brin, alors que la seconde paire d'amorces (paire avant) est utilisée pour la synthèse du second brin. Les amorces universelles entretiennent la réaction d'amplification et produisent la majeur partie du produit final.

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